SEQUENCIAMENTO DO DNA

SEQUENCIAMENTO DO DNA Temos duas técnicas mais importantes para o sequenciamento de DNA, são o método químico de degradação de bases e o método de terminação da cadeia ou método de Sanger. Os dois métodos são baseados na produção de um conjunto de fitas simples de DNA que são separadas pelo princípio de eletroforese. O método de terminação da cadeia gera dados que são mais facilmente interpretados. O sequenciamento por terminação da cadeia é baseado na incorporação de desoxinucleotídeos e de didesoxinucleotídeos a uma cadeia de DNA em crescimento, tendo como molde o DNA de interesse. Quando os didesoxinucleotídeos são adicionados, a extensão da cadeia é interrompida, pois esses didesoxinucleotídeos não apresentam um grupo hidroxila necessários para a ligação do próximo desoxinucleotídeo. Como esses didesoxinucleotídeos são marcados, podem ser detectados e a seqüência dos nucleotídeos identificada. Frederick Sanger é o responsável pelo desenvolvimento do sequenciamento do DNA, conhecido como método de Sanger. É o método mais usado devido à sua simplicidade. A TECNICA DO DNA RECOMBINANTE É um conjunto de técnicas, de ampla aplicação. Pode ser usada para estudar mecanismos de replicação e expressão gênica, na determinação da sequência de um gene (e por tabela a proteína que ele codifica), ou no desenvolvimento de 'novas' culturas microbianas, capazes de resistir a certos antibióticos ou transmitir determinadas características. A técnica de DNA…

Sequenciamento de DNA – noções básicas Paulo Paes de Andrade Texto baseado na aula de sequenciamento do site www.biolmol.cjb.net Até meados da década de 70 não era nada simples obter uma sequência de DNA, fosse ele fita simples ou dupla. De fato, trabalhar com DNA era muito mais complicado do que com proteínas e o conhecimento sobre os ácidos nucléicos avançava de forma lenta. No início da década de 80 uma técnica relativamente rápida de sequenciamento de DNA foi desenvolvida, que…

O sequênciamento de DNA é um processo que determina a ordem dos nucleotídeos de uma amostra. Para que a reação de seqüenciamento aconteça o DNA tem que ser clivado por enzimas de restrição, logo após o DNA tem que ser submetido a desnaturação, onde vai-se romper as pontes de hidrogenio tornando- se uma fita simples. Nesse método o DNA fita simples será o DNA molde da reação. No tubo juntamente com DNA vai ser adicionado um primer, DNA polimerase, os DNTP´s e uma pequena concentração de…

Espectroscopia de fluorescência aplicada a sequenciamento de DNA Espectroscopia de fluorescência aplicada a sequenciamento de DNA Nos últimos 20 anos, houve grandes avanços no uso de espectroscopia de fluorescência para estudar DNA, além de outras inúmeras aplicações dentro das ciências biológicas. A espectroscopia de fluorescência é a metodologia dominante em áreas como diagnóstico médico, biotecnologia, sequenciamento de DNA, forense, entre outras. Métodos de…

Seqüenciamento de DNA Seqüenciamento de fragmentos de genes permite a avaliação direta de polimorfismos de DNA, fornecendo o melhor tipo de dado para inferências filogenéticas e determinação de relações de parentesco entre indivíduos e populações. Diferentes segmentos de DNA mitocondrial (mt) e nuclear evoluem a taxas diferentes. Regiões de evolução rápida são adequadas para o estudo de organismos proximamente relacionados, enquanto regiões mais conservadas são mais apropriadas…

sequência de DNA de organismos, iniciando uma completa revolução na biologia. Sua esplêndida técnica de sequenciamento utilizando os chamados “didesoxinucleotídeos” imperou absoluta na ciência genômica ao longo dos 30 anos que se seguiram à sua publicação original. Sanger abriu as portas para toda a análise informacional em ciências genômicas e mostrou que era definitivamente possível compreender genomas ao “soletrá-los” através da sequência de bases químicas do DNA: A, C, T e G. Com a…

uma série de processos  Tem por objetivo determinar a sequencia de nucleotídeos na molécula de DNA;  Na década de 50, James Watson e Francis Crick descobrem a estrutura do DNA; Publicam na revista Nature o artigo  “Molecular Structure of Nucleic Acids: A Structure for Deoxyribose Nucleic Acid”;  O DNA se estrutura na forma de uma dupla hélice e as bases nitrogenadas se ligam aos pares por ligações de H;  Até a década de 70 era extremamente…

UNIVERSIDADE CATÓLICA DE PETRÓPOLIS GRADUAÇÃO EM BIOMEDICINA LAISA BRAND RIOS ANÁLISE DAS SEQUÊNCIAS DE DNA CODIFICANTES DE CITOCROMO B EM MICROORGANISMOS CAUSADORES DE DOENÇAS TROPICAIS Petrópolis 2014 2 [ Di git UNIVERCIDADE CATÓLICA DE PETRÓPOLIS e u ma cit aç LAISA BRAND RIOS ão do do cu ANALISES DE SEQUÊNCIAS DE DNA CODIFICANTES DE CITOCROMO B EMme MICROORGANISMOS CAUSADORES DE DOENÇAS TROPICAIS nt o ou o Projeto Final de semestre…

SIMULANDO A TÉCNICA DE SEQUENCIAMENTO DO DNA Autores: José Mariano Amabis e Solange Soares de Camargo Versão inicial: José Mariano Amabis Ilustrações: Pablo Candiani Editoração: Gledsley Muller Ficha Técnica: Tema central: Compreender a técnica utilizada para o seqüenciamento do DNA Área de interesse: Biologia Molecular/Genética Público Alvo: Alunos do Ensino Médio ou da Graduação Número de participantes: 40 alunos em grupos de três a cinco. É necessário que se forme pelo menos…

SEQUENCIAMENTO DE DNA PELA PLATAFORMA 454 As novas tecnologias de sequenciamento, denominadas de tecnologias de sequenciamento de nova geração, começaram a ser comercializadas em 2005. E estão evoluindo rapidamente. Todas essas tecnologias promovem o sequenciamento de DNA em plataformas capazes de gerar informação sobre milhões de pares de bases em uma única corrida. Dentre as novas plataformas de sequenciamento, duas já possuem ampla utilização em todo o mundo: a plataforma 454…