sequenciamento de DNA

O sequênciamento de DNA é um processo que determina a ordem dos nucleotídeos de uma amostra. Para que a reação de seqüenciamento aconteça o DNA tem que ser clivado por enzimas de restrição, logo após o DNA tem que ser submetido a desnaturação, onde vai-se romper as pontes de hidrogenio tornando- se uma fita simples. Nesse método o DNA fita simples será o DNA molde da reação. No tubo juntamente com DNA vai ser adicionado um primer, DNA polimerase, os DNTP´s e uma pequena concentração de DNTPs modificados chamados de ddNTP.
Quando as reações são incubadas em temperaturas especificas, o primer irá se ligar na extremidade 5’ que é complementar a extremidade 3’. (Sem o primer a DNA polimerase não conseguira adicionar os nucleotídeos para a síntese da nova fita). Os ddNTP’s vão se ligar na posição do dNTP normal fazendo com que interromperrompam a reação ao se incorporarem na nova fita, isso é possível porque o ddNTP não possue 3’OH. O fato de não possuir o 3’OH impossibilitara a polimerase adicionar os nucleotídeos necessários para continuar a síntese da nova fita. Como esta em pequena concentração o ddNTP poderá se ligar no meio, fim ou inicio de uma cadeia fazendo com que a síntese seja interrompida naquele ponto.

Cada uma das amostras vai conter sequências de fragmentos incompletos de diferentes tamanhos. As amostras terminarão nos quatro nucleotídeos A, T, C, G. Após a reação os fragmentos são colocados em gel de poliacrilamida na qual vão migrar de acordo com seu tamanho.
O seqüenciamento de DNA é aplicado em Analise Genômica de insetos, bactérias, Ratos etc.É também aplicada em ciências forenses e filogenéticas.

Referências:
-ROBERTIS, Eduardo de, HIB, José. Métodos de estudo em biologia celular. In:373-374. Bases da biologia celular e molecular. 4ºEd.Rio de janeiro: Guanabara Koogan, 2006.
-http://blog.cca.ufscar.br/lamam/files/2010/07/sequenciamento.htm