metodos coliformes

Coliformes totais e Escherichia coli
Materiais utilizados:
Frasco de coleta de vidro esterilizado (121ºC durante 15 min)
Autoclave
Tubo de ensaio
Capela de fluxo laminar
Estufa bacteriológica 35º2º
Placas Petrifilm ®
Preparo das soluções:
Solução Peptonada 1%:
8,5g de NaCl
1 g de peptona de carne ou peptona bacteriológica
Avolumar a 1000 mL de água deionizada (colocar 1 min no microondas). Preparar só o necessário.
- colocar 10 mL da solução peptonada em cada tubo de ensaio e fechar com a tampa. Autoclavar a 121ºC por 15 min (durabilidade de 6 meses). Lembrar de autoclavar ponteiras de micropipetador também.
- retire apenas as placas que serão utilizadas do freezer e deixe atingir a temperatura ambiente.
- Antes da incubação, limpar o frasco de coleta com álcool 70% e inverter o frasco 25 vezes para homogeneizar a amostra.
- Na capela com o fogo ligado, abrir um tubo (com o dedo minguinho) e retirar 1mL da solução peptonada do tubo, pegar outra ponteira e colocar 1 mL do efluente. Desta maneira terá a diluição 10-1. Colocar no vórtex para homogeneizar.
- Abrir e flambar o tubo e com nova ponteira retirar a alíquota de 1 mL para a incubação.
- Levantar o plástico e cuidadosamente colocar 1mL sobre o centro da placa Petrifilm. Coloca o plástico e “aperta” com uma placa de petri para espalhar a amostra. Identifica a placa e incube em estufa bacteriológica.
Obs.: placas lacradas devem ser mantidas refrigeradas. Qdo aberto, colocá-las no freezer em frasco lacrado.
Leitura em 24h:
- contabilizar as colônias vermelhas e azuis associadas com gás como sendo Coliformes totais.
- contabilizar as colônias azuis associadas com gás como Escherichia coli.
Leitura em 48h (contador de colônias):
- contabilizar as colônias azuis associadas com gás e somar com as contabilizadas em 24h, este é o resultado de E. coli.

Expressão dos resultados:
- Para expressar os resultados em Unidade Formadora de Colônia em 100mL de efluente (UFC/100mL) deve: