Homogenato

(especialmente o DNA) podem estar firmemente ligados a cátions ou proteínas catiônicas tais como histonas protoaminas. Assim, estas proteínas estarão presentes juntamente com os ácidos nucléicos, quando estes últimos forem precipitados a partir de um homogenato de fígado de rato. Os polinucleotídeos podem ser 18 Humberto Reis Matos Bioquímica Prática - UFS precipitados pela ação de soluções salinas, ou por álcool em presença de sais. Nesta prática, usaremos um método…

Western blot Um Western blot é um método em biologia molecular e bioquímica para detectar proteínas em um homogenato (células bem trituradas) ou um extrato de um tecido biológico. Essa técnica usa eletroforese em gel para separar as proteínas desnaturadas por massa. As proteínas são então transferidas do gel para uma membrana (tipicamente de nitrocelulose), onde foram usados como sonda anticorpos específicos à proteína. Como um resultado, os pesquisadores podem examinar a quantidade…

-Descartar Sedimentado -Adicionar 20mL de tampão de lise (tampão fosfato 0,1mol/L pH 6,8 com EDTA 5mmol/L) gelado em cada tubo. -Ressuspender em vórtice -Adicionar 200μL de PMSF (fluoreto de αtoluenosulfonida) em etanol -Homogeneizar em vórtice Homogenato -Adicionar o conteúdo dos dois tubos em um almofariz gelado. -Adicionar 10g de areia (lavada e seca) -Macerar a mistura por 15 min em banho de gelo. Células + Areia 2 2 Células + Areia -Redistribuir a mistura em 2 tubos de…

inicial é metabolizado pela via das pentoses e quanto é metabolizado pela ação combinada da glicólise e ciclo de Krebs. Uma alíquota do homogenato do tecido em estudo é incubada com glicose-6-fosfato com 14C no C1 e outra, com o mesmo substrato com 14C no C6. Que resultado deve ser esperado, em termos de produção de 14CO2 em função do tempo, se o homogenato metaboliza glicose-6-fosfato: a) Somente pela ação combinada da glicólise e ciclo de Krebs, b) Somente pela via das pentoses,…

por exemplo, hormônios. Pelo fato do radioimunoensaio ser muito caro, o teste ELISA pode ser uma alternativa muito mais simples e barata. WesternBlot Um Western blot é um método em biologia molecular e bioquímica para detectar proteínas em um homogenato (células bem trituradas) ou um extrato de um tecido biológico. Essa técnica usa eletroforese em gel para separar as proteínas desnaturadas por massa. As proteínas são então transferidas do gel para uma membrana (tipicamente de…

densidade dos Ag, o tamanho celular. Uso de multiplos Ac fluorescentes (hiv, leucemia) - Western blotting: Separação e detecção de proteínas, Identificação de Ac específico, Ac radiomarcado ou Ac sec. ligado a enzima. para detectar proteínas em um homogenato (células bem trituradas) ou um extrato de um tecido biológico. - Radioimunoensaio (RIA): O radioimunoensaio é um dos métodos mais sensíveis para a análise quantitativa das reações antígeno-anticorpo, permitindo medidas rápidas e…

soluções muito concentradas, este procedimento chama-se salting out (adição de sal), com adição de sal a proteína perde água e fica desidratada. Essas técnicas preliminares não darão uma amostra muito pura, mas tem uma importante tarefa de preparar o homogenato para os procedimentos mais eficientes como a cromatografia e a eletroforese. Métodos de purificação das proteínas Cromatografia em coluna È um dos métodos mais comuns de purificação de proteínas (figura 1). Esta técnica…

completa; O procedimento de sonicação deverá ser feito “no gelo”; Centrifugar as amostras a 12.000 g x 10 min x 4ºC; Retirar o sobrenadante e descartar o pellet; Para adipócitos, retirar o infranadante. Reservar em eppendorfs; Retirar desse homogenato, 10 µL para a dosagem de proteína; Dosar a proteína por Bradford; As amostras das células e tecidos são armazenadas no -80ºC em tampão RIPA; Calcular a quantidade de proteína a ser pipetada no gel a partir da dosagem…

prazo de validade, temperatura de conservação, dentre outras (DA CONCEIÇAO et. al., 2009). 2. Objetivo Geral * Avaliar o estado de qualidade, conservação de carnes e pescado; 3. Objetivos Específicos * Determinar o tempo de filtração de homogenatos de carne e pescado; * Avaliar as características dos filtrados obtidos; * Determinar o pH dos filtrados obtidos. 4. Materiais e Métodos * Fiscalização de carne e pescados * Materiais Vidrarias: * Erlenmeyer; *…

macromoléculas, sendo muito variáveis em forma e tamanho. . Os Lisossomos foram primeiramente, postulados pelos estudos bioquímicos de Christian De Duve e col. (1955), que observaram uma marcante atividade da fosfatase ácida, na fração mitocondrial de homogenato de hepatócitos de rato. . Recentrifugando a fração mitocondrial, mostraram que a maioria da atividade da fosfatase ácida residia na fração “light”, e não na “heavy” (a mitocondrial). Em seguida, outras hidrolases…