Pratica bioquimica atividade da maltase

Avaliação da Atividade da Maltase
Débora Maria Alves Viegas Gustavo Morandi Rahmé Mayara Franco Rodrigues

Objetivo
• Avaliar a atividade da enzima maltase obtida através do fracionamento celular da levedura Saccharomyces cerevisiae presente no fermento (Fermix). • Realizar diluição do lisado da levedura para em seguida, construir a curva padrão do fenol e determinar a atividade da enzima na melhor diluição escolhida.

Introdução
• As leveduras (pertencentes ao grupo dos fungos) são organismos eucarióticos unicelulares que existem no solo, ar, plantas, frutos e alimentos. • A espécie mais comum é a Saccharomyces cerevisae, conhecida vulgarmente como levedura de padeiro ou da cerveja. • Encontra-se no centro da Biotecnologia tradicional, pelo seu papel milenar na produção de pão, vinho e cerveja, devido à sua capacidade de produzir álcool (principalmente o etanol, presente em bebidas fermentadas) e dióxido de carbono (que permite a expansão da massa do pão) a partir de açúcares.

Introdução
• Maltase é uma enzima encontrada em plantas, animais, bactérias, fungos, leveduras, e seres humanos. • Atua sobre a maltose transformando-a em moléculas de glicose.

Procedimento Experimental
1) Fracionamento celular:
2 tubos com 5 g de Fermento Fermix em cada -Adicionar 40mL de H2O destilada gelada em cada tubo. -Dissolver em vórtice. -Centrifugar a 4000 rpm por 15min a 4°C.

Sobrenadante
-Descartar

Sedimentado

-Adicionar 40mL de H2O destilada gelada em cada tubo. -Dissolver em vórtice. -Centrifugar a 4000 rpm por 15min a 4°C.

Sobrenadante
-Descartar

Sedimentado
-Adicionar 40mL de H2O destilada gelada em cada tubo. -Dissolver em vórtice. -Centrifugar a 4000 rpm por 15min a 4°C.
1

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Sobrenadante
-Descartar

Sedimentado -Adicionar 20mL de tampão de lise (tampão fosfato 0,1mol/L pH 6,8 com EDTA 5mmol/L) gelado em cada tubo. -Ressuspender em vórtice -Adicionar 200μL de PMSF (fluoreto de αtoluenosulfonida) em etanol -Homogeneizar em