Homogenato

............................................................................................62 Figura 21. Potencial de Membrana............................................................................64 Figura 22. Atividade da Caspase-3 em homogenato de córtex renal de ratos............................................................................................................................65 Tabelas: Tabela 1 - Drogas anticâncer com nefrotoxicidade inerente......................

método de ELLMAN et al. (1961) modificado conforme a seguir: o hemisfério direito do cérebro era homogenizado (aproximadamente 80mg de tecido por ml de solução de NaCl 0,9% resfriada) em tubo de ensaio com auxílio de um bastão de vidro. Estes homogenatos eram centrifugados a 12000g, por cinco sessões de dois minutos cada, intercaladas com resfriamento em gelo (totalizando 10 minutos de centrifugação). O sobrenadante destas amostras foi armazenado em tubos plásticos e congelados…

ajuda de lâminas de vidro, colocado em microtubos com a adição de 0,8 ml de DNAzol (Gibco BRL, EUA) e 2 gotas de vidro mm. Em seguida, homogeneizou-se durante 2 min utilizando Vortex (Fisher Scientific, EUA) e foi aquecido a 90 º C durante 30 min. O homogenato foi centrifugado durante 5 minutos a 3000 xg para recolher o lisado, seguido por outra centrifugação a 14.000 x g. Dez ug de glicogénio foram adicionados ao sobrenadante, e o DNA foi precipitado pela adição de 0,5 ml de etanol…

tubo, podendo o plasma ser separado e analisado. Centrifugação diferencial A centrifugação diferencial foi desenvolvida nos anos 60 do século XX por Christopher John Champerline e Juan Burdettee. Consiste em sujeitar uma amostra feita homogênea (homogenato) de um tecido ou órgão (por exemplo, fígado) a repetidas centrifugações, aumentando de cada vez a velocidade angular. Hoje em dia esta técnica é largamente substituída pela centrifugação isopícnica. Esta técnica permite a separação…

. . . 127 ção consistiu de tampão fosfato 50 mM, pH 7,5, contendo 2-mercaptoetanol 1 mM e MnSO 4, 5µM. Foram utilizados 10 ml de tampão de extração por grama de tecido, para pericarpo e cotilédones, e 20 ml para tegumento. Em seguida o homogenato foi filtrado em seis camadas de gase e centrifugado a 18000 g, durante 20 minutos entre 0 e 4°C. As atividades das invertases foram determinadas em meio de reação (4,0 ml) constituido de 0,5 mL do extrato enzimático, 1,0 ml de…

mol/L ureia, 4% CHAPS (w/v), 1 mmol/L de EDTA, e ditioeritritol 10 mmol/L) contendo um coquetel de comprimidos inibidor de protease (Roche, Mannheim, Alemanha). Para se obter uma fração solúvel após a 8000 rpm durante 10 min, o sobrenadante, o homogenato total foi centrifugado a 10000 rpm durante 10 min a 4 ºC. Ácido tricloroacético (TCA) a 50% foi adicionada ao sobrenadante para uma concentração final de 12,5%. O precipitado de proteína foi recolhido, em seguida, misturada com etanol a…

pinocitadas pela própria célula, bem como, a digestão das próprias organelas celulares, quando da necessidade de renovação das mesmas. Os lisossomos foram descobertos primeiramente, com os estudos das enzimas hidrolíticas. Assim, quando se preparava homogenatos de fígado de rato, por exemplo, constatava-se a presença de cinco enzimas hidrolíticas. Experimentos posteriores mostravam que tais enzimas seriam inativas para os seus substratos se a fração fosse preparada com o cuidado de não…

Universidade Federal de Viçosa. 3.2. Análises microbiológicas As amostras de carcaças foram homogeneizadas, no dia da coleta, em 140 mL de água peptonada, durante 1 minuto, em homogeneizador peristáltico (Stomacher). Cinqüenta 26 mililitros do homogenato foram destinados à pesquisa de L. monocytogenes, sendo cada 25 mL utilizados em métodos de enriquecimento seletivo primário distintos. Pesquisa de Listeria sp por técnica convencional A determinação da presença de L.…

predominantemente encontrada na membrana celular e que possue papel importante na transdução de sinal da corrente sanguínea para a camada de músculo liso associada ao vaso induzindo, assim, o relaxamento vascular. Ribeiro e cols., 1990 demonstraram que os homogenatos de glândulas salivares de Rhodnius possuem um vasodilatador com as características gerais do NO. Uma vez que o NO possui uma meia vida extremamente curta ele é na verdade injetado pelo inseto na corrente sanguínea,…

(concentração final 100 μM) por ml de solução de lise apenas no momento da homogeneização porque o PMSF é muito instável em meio aquoso. Quantificar células e estimar a quantidade de proteínas (107 células ~1 mg de proteína) de formar a obter um homogenato a cerca de 2 mg de proteína por ml, que, quando diluído com Sample Buffer a 1:1 fornecerá solução a 1 mg/ml (50 μg/50 μl nos wells). Células: quebrar o pellet celular e adicionar a quantidade adequada de Solução de Lise.…