Relatórios Bio

a) Comentar os seguintes fatores que influenciaram na migração do DNA:
- Tamanho e conformação do DNA:
Os fragmentos de DNA menores, ou seja , menos peso molecular, migram mais rápido e em distância maior do que os fragmento maiores, de maior peso molecular.
- Concentração de agarose:
O tamanho do poro é definido pela concentração do gel: quanto menor for a concentração do gel maior será a porosidade e, portanto maior o fragmento de DNA que poderá ser separado. Contudo, quanto menor a concentração do gel, mais frágil ele se torna.
- Presença de brometo de etídeo no gel:
O brometo de etídio (EtBr) é um intercalante de DNA utilizado em procedimentos de biologia molecular como eletroforese em gel de agarose para a visualização de fragmentos de DNA. A capacidade de intercalação na molécula de DNA o torna um produto de grande periculosidade de caráter mutagênico, moderado tóxico e possível carcinogênico.
b) Comentar sobre as possíveis anomalias de migração:
Caso o DNA das amostras não migre no gel e fragmentos ocorram ao longo da linha da canaleta significa que o DNA está degradado. Isso pode ocorrer pelo manuseio inadequado, período de armazenamento muito longo ou armazenamento inadequado, além de outros fatores.
c) O tampão da amostra contem um agente espessante (glicerol) e um corante: qual a função desses reagentes nesse tampão?
Esse corante é uma solução composta de azul de bromofenol (e/ou xileno cianol) e glicerol e é utilizado para aumentar a densidade das amostras, impedindo que elas saiam dos poços, além de dar a coloração que serve como indicador do progresso eletroforético.
d) Porque é necessária a adição de brometo de etídeo ao gel de agarose?
O brometo de etídeo é um corante que se intercala nas moléculas de ácidos nucléicos, que fluorece pela indução da luz UV.
Referências
CARNIELLO, Renan S. et al. Descontaminação de Resíduos de Brometo de Etídio gerados em Procedimentos de Biologia Molecular. IV Mostra Interna de Trabalhos de Iniciação