eletroforese

ELETROFORESE

DEFINIÇÃO
• É uma técnica laboratorial de separação de frações de proteínas, enzimas, DNA e RNA, baseada na migração das moléculas carregadas, numa solução, em função de aplicação de um campo elétrico.

FUNDAMENTOS TEÓRICOS
• Introduzida por Arne Tiselius em
1937, foi inicialmente realizada em meio líquido, sendo posteriormente aperfeiçoada com emprego de um meio-suporte. • É uma técnica versátil, relativamente simples, rápida e de grande poder informativo, tornando-se indispensável nas mais diversas áreas da biologia molecular. POTENCIAL DE USO
1. Estudo clínico do plasma e líquido de mamíferos;
2. Resolução de misturas complexas de:
•. proteínas;
•. ácidos nucléicos;
•. aminoácidos;

POTENCIAL DE USO
3. Identificação de componentes;
4. Determinação da pureza:
• pureza e homogeneidade molecular;
• genética molecular;

PRINCÍPIOS DA TÉCNICA DE
ELETROFORESE
• A eletroforese consiste na migração de moléculas ionizadas, de acordo com as suas cargas elétricas e pesos moleculares em campo elétrico.
• Moléculas com cargas negativas migram para o polo positivo (ânodo) e moléculas com cargas positivas migram para o polo negativo (cátodo).
• Em razão das proteínas serem substâncias anfóteras, é indispensável manter constante o pH do meio durante a eletroforese, através do uso de soluções-tampão para não gerar cargas, as quais podem interferir na corrida.

CONDUÇÃO DA
ELETROFORESE
• Gradiente de densidade
• Meios de suporte:
-

Papel filtro;
Sílica gel;
Membrana de acetato de celulose;
Amido;
Gel de agarose;
Poliacrilamida

Fatores que influenciam na condução Eletroforética
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

pH do meio pI (ponto isoelétrico) ou pK das substâncias
Eletrólitos usados
Interações com a fase fixa
Temperatura
Evaporação
Movimentos hídricos no suporte

Pela simples variação do pH, é possível :
• Separar uma proteína de várias outras
• Separar um grupo de proteínas associadas