eletroforese

Eletroforese
Os métodos eletroforéticos são os mais comuns e potentes na avaliação da pureza e homogeneidade protéica.
São valiosos como métodos indicadores de estabilidade e sua vantagem é que requer quantidades muito pequenas de amostras.

Colocar fig13.1 e explicar
Existem dois tipos de medições eletroforéticas mais utilizados:

Eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS)

Colocar uma imagem eletroforese e explicar
As moléculas detectadas na amostra depois da eletroforese são quantificadas com coloração obtida com o azul de Croomassie, por exemplo, mediante análise densitométrica.
O método SDS-PAGE é utilizado para determinar quantitativamente a pureza da amostra, com respeito a dímeros e agregados covalentes de maior massa molar que a proteína monomérica.

Para o cálculo da impureza, usa-se a seguinte equação:

I(%) = Porcentagem estimada de impurezas;
Pm = menor massa de proteína aplicada que pode ser visualizada e que corresponde `a raia Lm;
Pi = massa de proteína aplicada à raia Li.
Fig13.2

Focalização Isoelétrica (IEF)

Separa proteínas segundo sua carga em um campo elétrico. Uma vez que a migração da proteína depende de sua composição de aminoácidos, as formas alteradas das proteínas e outras proteínas migrarão para diferentes pontos do gel, sendo possível manter um controle das proteínas de interesse.
IMAGEM 13.3 E EXPLICAR
Esta técnica também pode ser associada a um método imunológico.
A IEF é empregada como prova de pureza e caracterização de uma proteína, comparando-se com um padrão correto de bandas no intervalo de PI adequado. Pode ser utilizado também para avaliar a estabilidade.

Eletroforese capilar de alta eficiência

Oferece vantagens de alta resolução do conteúdo protéico. O número de picos corresponde ao número de isoformas obtidas e a estimativa das áreas correspondentes a cada pico permite estabelecer o conteúdo percentual de cada uma delas.
Avalia-se também a