Quantificação

A quantificação precisa de proteínas é essencial para todo tipo de experimento que trabalha com elas, em várias áreas como biologia molecular e celular, bioquímica, biologia do desenvolvimento e neurociências. Desde o século passado métodos de quantificação diferentes foram desenvolvidos, devido a sua ampla utilização. A quantificação total de proteínas engloba métodos tradicionais como absorbância de UV em 280 nm, ensaio de ácido bicinconínico (BCA), Bradford e método de Lowry. Os reagentes são vendidos normalmente como kits, mais práticos, desenvolvidos pelos fornecedores comerciais. As quantificações envolvendo apenas uma proteína específica incluem o teste ELISA, western blot, espectrometria de massa, dentre outros. Aqui iremos discutir alguns dos métodos mais utilizados para determinar a concentração proteica, ressaltando suas vantagens e limitações. É importante frisar que, além desses ensaios não serem compatíveis com todas as proteínas, nenhum deles é específico somente para proteína, com componentes não proteicos podendo interferir no resultado. As agências regulatórias do governo ou grupos comerciais podem exigir métodos específicos para a determinação total de proteínas. Por exemplo, a Associação Internacional da Indústria Sérica ( www.serumindustry.org), grupo comercial para fornecedores de soro, exige que concentração proteica em produtos séricos seja determinada pela Reação de Biureto. No Brasil, a ANVISA determina que para o registro de produtos…

QUANTIFICAÇÃO DE ACIDOS NUCLEICOS E PROTEINAS CAMILA CAROLINE DA SILVA SOZINHO (BM1MA) BELÉM – PARÁ 2014 O DNA é a biomolécula que possui toda a informação genética de qualquer individuo permitindo saber o grau de afinidade entre eles. Podemos fazer técnicas de extração e quantificação de DNA, analisando sua estrutura…

utilizando a metodologia do ácido bicinconínico ( BCA ) Material e Métodos 1-Desnaturação por ação do calor: Em um tubo de ensaio foi adicionado 20 gotas da solução de ovoalbumina e aquecido a cerca de 85 °C. 2- Desnaturação por ácidos e álcalis fortes: Foi utilizado 2 tubos de ensaio e adicionado em cada tubo 20 gotas da solução de ovoalbumina, no tubo 1 acrescentado mais 20 gotas de HNO3 concentrado e no tubo 2 mais 20 gotas de NaOH 12N. 3- Desnaturação por reação com reagentes…

concentração de proteínas baseiam-se em métodos colorimétricos, ou seja, a concentração de proteína é estimada através da leitura espectrofotométrica de um produto corado. Por exemplo, o método "Bradford" baseia-se no facto de, em condições acídicas, o pico de absorção do azul de Coomassie G-250 passar de λ=465 nm para λ=595 nm quando este corante se liga tanto a grupos hidrófobos como iónicos dos resíduos de aminoácidos das cadeias polipeptídicas. Por seu lado, o método "BCA" baseia-se…

| |O veneno total será solubilizado em 50 mM de tampão fosfato de potássio, com pH 7,0. Posteriormente, as amostras serão quantificadas | |utilizando-se o ácido bicinconínico, (kit BCA -Bioagency), de acordo com as especificações do fabricante. | |3. FRACIONAMENTO DA AMOSTRA PROTÉICA | |3.1 – As amostras do veneno total,…

............ 17 Discussão ......................................................................................................... 20 Conclusão ......................................................................................................... 25 Referências Bibliográficas ................................................................................ 26 iv Lista de Abreviaturas Apaf1- Factor activador das proteases apoptóticas Bad- “Bcl2 antagonist of cell death”…

42 dias dependendo da solução preservante) essas células ficam susceptíveis aos danos oxidativos que podem levar às chamadas “lesões de estoque”. Dentre as lesões de estoque podemos destacar a perda da deformabilidade eritrocitária e a diminuição da carga elétrica da membrana celular (avaliada através da mensuração de potencial zeta) [FONTES et al. 2008; WOLFE 1985]. Essas injúrias oxidativas levam à redução da capacidade das hemácias se deformarem e à maior agregabilidade, levando a…

(9.000 rotações por 5 minutos) e filtrados em papel-filtro. Dez mililitros do filtrado, diluídos em 100 ml de cloreto de sódio 0,5%, foram deixados à temperatura ambiente, antes da determinação da atividade. Foram pipetados 0,04 – 1,0 ml da solução de maltose com 5 micromoles/ml, fazendo-se a diluição para 2 ml, em cada tubo, com água deionizada. Após adicionar 1 ml de ácido dinitrossalicílico reativo de cor à solução, esta foi incubada em banho de água fervente, durante 5 minutos. Após…

de 4,2,4’-triaminodifenilamina ...................................... 44 Figura 18. Hair-Dryer (GOETSCHI, 2000) ........................................................... 47 Figura 19. Hair-Straightener Nozzle (MORROW, 2000) ...................................... 48 Figura 20. Hair-Straightener (SHERO, 1909) ...................................................... 48 Figura 21. Alisador capilar elétrico equipado com gerador produzindo ânions e ozônio…