REAÇÃO DA POLIMERASE EM CADEIA

REAÇÃO DA POLIMERASE EM CADEIA - PCR O QUE É PCR? 1. É uma metodologia que se baseia na amplificação exponencial seletiva de uma quantidade reduzida de DNA de uma única célula, sem o uso de um organismo vivo. HISTÓRICO 1. Karys Mullis descreveu a PCR no final da década de 1980. 2. Em 1989, a Hoffman La Roche & Perkin-Elmer Corporation patenteou este processo . 3. O Prêmio Nobel da Química foi atribuído à Karys Mullis pelo seu trabalho em 1993. 4. Atualmente, método PCR é usado habitualmente nos laboratórios de investigação médica e biológica para uma variedade de tarefas. PARA QUE SERVE A PCR? 1. Diagnóstico médico; 2. Mapeamento genético; 3. Detecção de doenças hereditárias; 4. Clonagem de genes; 5. Testes de paternidade; 6. Criação de organismos transgênicos; PARA QUE SERVE A PCR? 1. Medicina Forense: 1. pequenas amostras de DNA retiradas da cena de um crime (pedaços de cabelo, gotas de sangue ou saliva, pedaços de pêlo ou até mesmo a minúscula quantidade de DNA deixada em uma impressão digital) são amplificadas para serem analisadas pelo método de fingerprinting. PROCEDIMENTOS 1. Devem ser realizados com o maior cuidado para evitar contaminações que possam alterar o resultado. 2. Em primeiro lugar, deve-se extrair o material genético da célula ou outro material a ser estudado (exemplo: vestígios de crimes) sem danificá-lo.(Normalmente o material extraído é o DNA (ADN), mas pode-se trabalhar com o RNA (ARN) em uma RT-PCR que é um desdobramento da PCR e possui outras…

de PCR (reação em cadeia da polimerase). Na década de 1980, passou-se a utilizar a técnica do PCR para fazer milhares de cópias de um único pedaço de DNA. Essa técnica é usada em tubos de ensaio contendo o DNA e mais alguns compostos necessários, como primers (DNAs iniciadores) e a enzima DNA polimerase (enzima que faz a replicação do DNA). Os primers são fitas de DNA, com mais ou menos 20 bases (A, T, C, G) complementares, isto é se ligam por complementaridade ao início da sequência…

Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) PCR - consiste em fazer cópias de DNA “in vitro”, usando os elementos básicos do processo de replicação natural do DNA. PCR Amplifica uma Seqüência Alvo Seqüência Alvo Replicação “in vitro” do DNA DNA DNA Supercoiled Alternância de temperaturas a cada ciclo: DESNATURAÇÃO ANELAMENTO Cromossomo POLIMERIZAÇÃO Alternância de temperaturas a cada ciclo D. Desnaturação: 94 C - 96 °C A. Anelamento: 37 C - 65 °C E.…

Termociclador REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) Técnica que permite a amplificação da quantidade de DNA específico utilizando a enzima Taq DNA polimerase, sequências iniciadoras específicas (primers) e variações de temperatura controladas. ETAPAS DO PCR 1. Adição de reagentes DNA ETAPAS DO PCR 1. Adição de reagentes DNA dATP dCTP dGTP dTTP (nucleotideos) ETAPAS DO PCR 1. Adição de reagentes DNA Taq polimerase Primers Tampão Água dATP dCTP dGTP…

Reação em cadeia da polimerase (PCR) A reação em cadeia da polimerase (PCR, Polymerase Chain Reaction) foi inicialmente desenvolvida por Saiki e colaboradores em 1985. Em seguida, foi aprimorada por Kary Mullis, que tentou publicar seus experimentos nas duas revistas científicas mais importantes do mundo, a Science e a Nature, as quais não reconheceram a importância de tal conquista. Kary Mullis acabou publicando seu trabalho sobre a amplificação do gene da β-globina humana em uma…

REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE PCR PCR – Reação em Cadeia da Polimerase Objetivo: • Aumentar o número de cópias do DNA a ser estudado http://www.sumanasinc.com/webcontent/anisamples/molecularbiology/pcr.html PCR – Reação em Cadeia da Polimerase Aplicações: • Na identificação e tratamento de doenças condicionadas geneticamente; • No diagnóstico muito sensível e específico de doenças infecciosas e parasitárias; • No diagnóstico do câncer; • Na manipulação terapêutica…

PCR em tempo real Pesquisa Uma Inovação tecnológica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) Caroline Monteiro Novais Estudante do curso de farmácia do Centro Universitário de Barra Mansa. E-mail: carol_farmacia@hotmail.com Melissa Pires-Alves Doutora em Biologia Celular e Molecular pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Professora do Centro Universitário de Barra Mansa. E-mail: melalves@ig.com.br Colaborador Fábio Freitas Silva Introdução advento da…

SENAI – CIC ISABELLA DA SILVA BROCARDO PATRICIA CAROLINE DE ARAUJO RELATÓRIO CURITIBA 2013 01) - Em um micro tubo de ensaio, coloca-se uma solução tampão, os nucleotídeos, um cofator, dois primers (um negativo e um positivo), o DNA a ser analisado, água ultrapura e por último a DNA Polimerase, devido ao fato de ter que ser mantida em resfriamento. - Coloca-se então o micro tubo em uma máquina de PCR, que realizara os ciclos de…

mailtonin_ron@hotmail.com nin_ron@hotmail.com Considerada uma tcnica de biologia molecular revolucionria, a reao em cadeia da polimerase (PCR Polymerase Chain Reaction) permitiu o rpido desenvolvimento do estudo de sequncias de cidos nuclicos. Desenvolvida por Kary Banks Mullis, em abril de 1983, essa tcnica de biologia molecular consiste em nada mais que a sntese enzimtica de cpias de cidos nuclicos em laboratrio. O cientista recebeu o prmio Nobel de qumica de 1993 por sua descoberta.…

FRANCISCO MARCOS BEZERRA DA CUNHA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) Valor diagnóstico na hanseníase neural pura Tese apresentada como requisito para obtenção do grau de Doutor. Curso de Pós-Graduação em Medicina Interna do Setor de Ciências da Saúde da Universidade Federal do Paraná Orientador: Prof. Dr. Lineu César Werneck CURITIBA 2003 EPÍGRAFE “A busca do conhecimento é uma luta incessante entre o não saber e o querer saber. Dialéctica presente no coração…