REAÇÃO DA POLIMERASE EM CADEIA

REAÇÃO DA POLIMERASE EM CADEIA - PCR
O QUE É PCR?
1. É uma metodologia que se baseia na amplificação exponencial seletiva de uma quantidade reduzida de DNA de uma única célula, sem o uso de um organismo vivo.
HISTÓRICO
1. Karys Mullis descreveu a PCR no final da década de 1980.
2. Em 1989, a Hoffman La Roche & Perkin-Elmer Corporation patenteou este processo .
3. O Prêmio Nobel da Química foi atribuído à Karys Mullis pelo seu trabalho em 1993.
4. Atualmente, método PCR é usado habitualmente nos laboratórios de investigação médica e biológica para uma variedade de tarefas.
PARA QUE SERVE A PCR?
1. Diagnóstico médico;
2. Mapeamento genético;
3. Detecção de doenças hereditárias;
4. Clonagem de genes;
5. Testes de paternidade;
6. Criação de organismos transgênicos;
PARA QUE SERVE A PCR?
1. Medicina Forense:
1. pequenas amostras de DNA retiradas da cena de um crime (pedaços de cabelo, gotas de sangue ou saliva, pedaços de pêlo ou até mesmo a minúscula quantidade de DNA deixada em uma impressão digital) são amplificadas para serem analisadas pelo método de fingerprinting.
PROCEDIMENTOS
1. Devem ser realizados com o maior cuidado para evitar contaminações que possam alterar o resultado.
2. Em primeiro lugar, deve-se extrair o material genético da célula ou outro material a ser estudado (exemplo: vestígios de crimes) sem danificá-lo.(Normalmente o material extraído é o DNA (ADN), mas pode-se trabalhar com o RNA (ARN) em uma RT-PCR que é um desdobramento da PCR e possui outras aplicações).
PROCEDIMENTOS:
1. Após a extração do DNA, adiciona-se uma mistura (conhecida como pré-mix) que contém:
1. dNTPs
2. Primers (ou iniciadores)
3. Solução Tampão.
4. Enzima Taq DNA polimerase
Taq DNA polimerase
1. A Taq DNA polimerase, também denominada Taq polimerase ou apenas Taq, é uma DNA polimerase termoestável, utilizada na amplificação de fragmentos de DNA através da técnica de PCR. O seu nome é devido a ter sido identificada pela primeira vez na bactéria Thermus aquaticus, encontrada