Enzima Polimerase

1. DESCREVA O FUNDAMENTO DA TECNICA DE PCR. A PCR (reação em cadeia da polimerase) é a técnica que permite a amplificação do DNA por meio de artifícios de variação de temperatura a duplicação de cadeias de DNA, envolvendo nucleotídeos, seqüências iniciadoras (primers) e enzima polimerases (enzima termoestável) cuja atividade depende de íons Mg++. Esta técnica revolucionou as pesquisas em biologia molecular, pois até então se demorava muito tempo para a amplificação do DNA. E é realizada em

processo conhecido como reparo por excisão de bases. Esta via começa com uma glicosidase, que remove a base danificada. Uma endonuclease corta o arcabouço, e então o espaço é preenchido por uma DNA polimerase. Uma das glicosidases de reparo mais bem conhecida é a uracila: DNA glicosidase. Esta enzima remove as uracilas que são erradamente incorporadas ao DNA durante a replicação ou que resultam da desaminação de citosina. Na reação da uracila: DNA glicosidase, o próprio substrato (DNA) contribui

enzimáticos, intermediários metabólicos e ácidos nucléicos. Os nucleóticos podem ser considerados os monômeros da DNA/RNA, sendo o polimero, o próprio DNA/RNA. 4) Para que o processo de replicação se inicie é necessária à atuação de uma enzima, a DNA polimerase. A enzima liga-se à cadeia de DNA e desliza sobre esta, quebrando as ligações entre as duas cadeias de nucleotídeos - ligações por pontes de hidrogênio - ficando então as duas cadeias de DNA separadas. Em seguida, os…

Desta forma, foi descoberto que uma das fitas é sintetizada continuamente, sendo denominada de fita líder, enquanto a outra se faz em pequenos fragmentos, sendo chamada de fita tardia. Estes fragmentos são denominados de fragmentos de Okasaki. Enzimas que participam do processo de replicação: DNA A – Reconhece a origem, e que com auxílio da HU estimula a iniciação. Helicases (DNA B) – Separa as fitas da dupla hélice do DNA usando ATP. SBB: Proteínas que se ligam as fitas simples,…

quantidade; Secagem do DNA A mais:  Normalmente acontece quando DNA é posto em estufa;  Se isto acontecer, quando se transfere para uma solução aquosa não é possível ressuspender; A menos:  Álcool fica no DNA;  Interfere com acção das enzimas e na concentração. Outras considerações da professora  Actividade dos detergentes é mais eficaz quando utilizados a quente. Aula nº2 – Análise espectrofotométrica do DNA: Quantificação e determinação do grau de pureza do DNA …

através da tradução desse RNA. O processo é catalisado pela enzima RNA-polimerase. Os fatores de transcrição (auxiliares da RNA-polimerase) são responsáveis por romper as ligações de hidrogênio entre as bases nitrogenadas dos dois filamentos de DNA, como um zíper. A RNA-polimerase executa várias funções sem necessidade de outras enzimas, ao contrário da DNA-polimerase, que codifica o genoma inteiro. O fator sigma da RNA-polimerase é responsável pelo reconhecimento da região do…

Aluna: Ivone de Oliveira Lima Monteiro UC06015273 – Turma NHA (4G e 4H) 1. EXPLIQUE O FUNCIONAMENTO DA TÉCNICA DE PCR. E CITE ALGUMAS DE SUAS APLICAÇÕES. A técnica de PCR (reacção em cadeia pela polimerase) baseia-se no processo de replicação de DNA que ocorre in vivo. Durante o PCR são usadas elevadas temperaturas de forma a separar as moléculas de DNA em duas cadeias simples, permitindo então a ligação de oligonucleótidos iniciadores (primers), também em cadeia simples e…

A multiplicação dos fragmentos de DNA Ocorrendo a fragmentação das moléculas de DNA, com o uso das enzimas de restrição, e o seu reconhecimento pela técnica de eletroforese em gel, o próximo passo é multiplicar (clonar) o fragmento obtido e submetê-los à tecnologia do DNA recombinante. A técnica de multiplicação da fita de DNA é chamada de PCR (reação em cadeia da polimerase). Na década de 1980, passou-se a utilizar a técnica do PCR para fazer milhares de cópias de um único pedaço de DNA. Essa

diretamente no citoplasma (procariotos não possuem núcleo). RNA polimerase: É uma enzima formada por muitas cadeias polipeptídicas, que catalisam toda transcrição do DNA. Só há um tipo de RNA polimerase que catalisa a síntese de todas as classes de RNA (mRNA, tRNA, e rRNA). No centro da RNA polimerase estão 4 subunidades(cadeias polipeptídicas individuais) que constituem o cerne da enzima: duas subunidades chamadas α, uma β e uma β’. O cerne da enzima catalisa o alongamento da molécula…

RNA iniciador  bidirecional O processo de polimerização Enzima que cataliza a polimerização dos nucleotídeos DNA polimerase: • adicionar desoxirribonucleotídeos à extremidade 3’ • utiliza um molde unifilamentar de DNA • requer uma extremidade 3’OH livre Síntese de DNA ocorre na direção 5’  3’ Fita molde: 3’  5’ e Fita nova 5’  3’ Forquilha de replicação Componentes necessários para a duplicação:  Principal enzima DNA polimerase III - catalisa a adição do nucleotídeo 3´na…