materiais e métodos amilase salivar

Materiais e métodos
1) Procedimento

TESTE 1 A coleta de saliva estimulada ocorreu através da mastigação com um pequeno pedaço de parafina e a saliva foi coletada em um tubo de ensaio (8mL). A partir da amostra de saliva, coletada e armazenada em banho de gelo, preparou-se uma solução estoque de saliva diluída na proporção de 1:50, da seguinte forma:
- Tubo 1: foi pipetado 2mL de água destilada e 2mL de saliva (foi homogeneizada);
- Tubo 2: foi pipetado 2mL de água destilada e 2mL da solução homogeneizada do Tubo 1 (foi novamente homogeneizada);
- Tubo 3: foi pipetado 2mL de água destilada e 2mL da solução homogeneizada do Tubo 2 (foi novamente homogeneizada);
- Tubo 4: foi pipetado 2mL de água destilada e 2mL da solução homogeneizada do Tubo 3 (foi novamente homogeneizada);
- Tubo 5: foi pipetado 2mL de água destilada e 2mL da solução homogeneizada do Tubo 4 (foi novamente homogeneizada);
-Tubo 6: foi pipetado 2mL de água destilada e 2mL da solução homogeneizada do Tubo 5 (foi novamente homogeneizada);
Foi retirado 2mL da solução do tubo 6 para descarte.
Em seguida foi pipetado 1 mL de solução 1% de amido em cada tubo, iniciando pelo Tubo 6.
Foi agitado e mantido à temperatura ambiente por 15 minutos.
Foi adicionado 2 gotas de lugol em cada tubo

TESTE 2
Foram realizados os mesmos procedimentos feitos no TESTE 1, porém foi utilizado solução aquosa de NaCl 1% em lugar da água destilada.

2) Influência do pH na atividade da amilase salivar
a) Preparou-se uma solução estoque de saliva (1:50);

b) O protocolo abaixo foi seguido da seguinte forma
TUBO
Solução (1,5 mL)
Saliva (1:50)
Amido (1%)
1
2
3
Tampão pH 2,5
Tampão pH 5,0
Tampão pH 7,0
0,5 mL
0,5 mL
0,5 mL
1mL
1mL
1mL

c) Foi incubado à temperatura ambiente durante exatamente 10 minutos;
d) Foi adicionada uma gota de lugol em cada tubo;
Quantificação da amilase salivar
Tomados 3 tubos de ensaio foram realizados os procedimentos a seguir:

Saliva
Controle