DILUIÇÃO SERIADA E QUANTITATIVA

INTRODUÇÃO
O experimento a ser realizado é o de diluição seriada, quantificação e qualificação dos microrganismos presentes em uma escova dental.
As escovas dentais concentram os microrganismos viáveis em suas cerdas, justamente pelo incorreto armazenamento dentro do banheiro em contato com vários outros agentes contaminantes após a escovação.
Com a diluição seriada e quantificação consegue-se estimar o número de colônias microbiológicas que se formaram durante o período de análise, e com a coloração de Gram pode-se avaliar quais seriam esses microrganismos.

OBJETIVO: Aprender técnicas de diluição seriada e quantificação de microrganismos utilizando escova dental como material a ser amostrado.

MATERIAIS UTILIZADOS
Caldo BHI(BRain Heart Infusion)
Solução Salina
Béquer
Escova dental usada
Tubos de ensaio
Solução salina
Micropipetas
Ponteiras
Placas de Petri
Bico de Bunsen
Alça bacteriológica
Lâminas
Corantes
Solução de cristal violeta
Solução de lugol
Solução de álcool-acetona
Solução de fucsina
Papel toalha
Água
Microscópio óptico

PROCEDIMENTO:
Observações: Antes de iniciar qualquer procedimento no laboratório é necessário que todos estejam devidamente paramentados.
Todo procedimento deve ser feito próximo ao bico de Bunsen para evitar contaminação com germes do ar

1- A escova dental usada foi mergulhada e agitada dentro do caldo BHI durante 5 minutos, tendo em vista que o caldo foi previamente preparado e os recipientes autoclavados.
2- Nos tubos de ensaio, que continham 5mls de uma solução salina, foi adicionado 1 ml da solução inicial ( caldo BHI ) com o auxilio de uma micropipeta e adicionado ao primeiro tudo, que foi identificado com a numeração (10-¹). E deste tubo foram retirados 1 ml e adicionados ao segundo tubo, (10-²) . Este mesmo procedimento foi feito para o terceiro tubo, (10³). A cada nova diluição foi usada uma ponteira diferente e esterilizada.
3- Com o auxílio de uma micropipeta foi-se