Reação Em Cadeia Polimerase

envolvidas na replicação: Em 1957, foi descrita por Kornberg a primeira polimerase de Escherichia coli, batizada de DNA-polimerase I. essa enzima apresentava a capacidade de colocar em ordem nucleotídeos em uma fita de DNA. A DNA-polimerase I é um monômero (ou seja, é formada por uma única cadeia polipeptídica) que apresenta três atividades importantes: 1. Atividade de Polimerização de nucleotídeos: comum a todas as DNA-polimerases 2. Atividade 3’-5’ exonucleásica: a enzima é capaz…

amostra. Trata-se da reação em cadeia da polimerase (PRC, do inglês polymerase chain reaction =O "milagre" da multiplicação). Atualmente, a reação em cadeia da polimerase é realizada em equipamentos automatizados e, graças a esse método, pode-se multiplicar a quantidade disponível de DNA por mais de um milhão, em pouco mais de duas horas! Inicialmente, a solução contendo o DNA a ser "clonado" é aquecida por dois minutos. Com isso, ocorre desnaturação da molécula e as duas cadeias se…

ainda maior dos genomas eucarióticos complexos consiste em sequências repetitivas de DNA não codificador. As fitas desnaturadas de DNA hibridizam uma à outra(reassociam), reestruturando as moléculas com fitas duplas. Uma vez que a reassociação é uma reação bimolecular, a taxa de reassociação depende da concentração das fitas de DNA. Quando fragmentos de DNA de E. coli eram desnaturados e a hibridização era propiciada, a taxa de reassociação era a mesma para todo o DNA, conforme era…

oligonucleótidos iniciadores (forward e reverse), designados de primers, que são complementares às regiões que flanqueiam a sequência a amplificar e fornecem a extremidade 3’OH livre necessária à ação da enzima que irá polimerizar a cadeia de DNA complementar. Os primers hibridam em cadeias opostas, orientando-se de forma a que a síntese de DNA ocorra entre eles e esteja limitada à sequencia desejada[2]. O desenho e a construção destes oligonucleótidos deve ser cuidadoso, de forma a…

normais ou neoplásicas. Uma técnica de imunofenotipagem utilizada é a citometria de fluxo, na qual marcamos células em suspensão com anticorpos monoclonais dirigidos contra as proteínas que pretendemos encontrar, e posteriormente “revelamos” esta reação através da identificação destes anticorpos ligados às células por lasers, em um equipamento que transforma sinais ópticos em sinais digitais, que podem ser analisados em softwares específicos. Esta técnica apresenta algumas…

em 70 a 85 % dos casos de meningite bacteriana, mas sua sensibilidade cai para valores inferiores a 50 % nos pacientes que já receberam antibioticoterapia antes da realização da punção lombar (8). O desenvolvimento da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) por Kary Mullis e colegas, na década de 80, revolucionou a análise baseada em ácidos nucléicos, permitindo a amplificação “in vitro” de seqüências específicas de DNA (9). A PCR tem sido amplamente utilizada nas mais…

maioria das proteínas embebidas na membrana mitocondrial interna são componentes da cadeia transportadora de elétrons, necessários para a fosforilação oxidativa. A membrana interna é normalmente rica em convoluções formando uma série de invaginações, conhecidos como cristas que aumentam a sua área superficial total. Ela contém proteínas com 3 tipos de funções: aquelas que conduzem as reações de oxidação da cadeia de transportes de elétrons, a ATP sintase que produz ATP na matriz e…

uma ligação fosfodiéster entre grupos 3'OH e 5'-PO4-, unindo covalentemente moléculas de DNA de fita dupla, resultando em uma molécula de DNA recombinante. Polimerases - catalisam a síntese de moléculas de DNA a partir de um molde, ou seja, sintetizam uma nova fita de DNA, complementar a um molde de DNA ou RNA preexistente. As polimerases são DNA ou RNAdependentes e são essenciais para a replicação e manutenção de todos os organismos. Modificadoras - catalisam reações que modificam…

(pentose), e são então chamados de “ácido desoxirribonucléico”. As moléculas de DNA são constituídas de duas cadeias de nucleotídeos espiraladas uma ao redor da outra na forma de uma dupla hélice. As duas cadeias são mantidas juntas por pontes de hidrogênio entre as bases de purina e pirimidina. O pareamento de bases mantém uma distancia constante entre o esqueleto de fosfato-pentoses das duas cadeias à medida que elas se espiralam uma ao redor da outra. A especificidade é imposta no…

palavras, gera uma cópia fiel do DNA de maneira tal que este passe para a geração seguinte. Como já visto na disciplina anterior, de acordo com o ponto de vista químico, o DNA é um longo polímero de unidades simples (monômeros) de nucleotídeos, cuja cadeia principal é formada por moléculas de açúcares e fosfato intercalados e unidos por ligação fosfodiéster. Ligada à molécula de açúcar está uma das quatro bases nitrogenadas, A, T, C ou G. A composição química pouco variável (apenas…