Eletroforese

Determinação do limite mínimo de detecção da técnica de PCR “semi-nested” para Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae

Teló E P, Schmitt V, Mombach A B, Chesky M

Hospital de Clínicas de Porto Alegre – Unidade de Microbiologia e Biologia Molecular

RESUMO

Mundialmente, as meningites bacterianas constituem importante causa de morbimortalidade na infância, exigindo um diagnóstico rápido e preciso no manejo dos pacientes. O objetivo deste estudo foi determinar o limite mínimo de detecção da técnica de PCR “semi-nested” “in house” para os três principais agentes causadores de meningites bacterianas: Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae. Diluições seriadas de cada bactéria foram submetidas à técnica de PCR “semi-nested” para detecção simultânea dos três microorganismos, pela amplificação de uma região do gene bacteriano 16S rRNA. Os produtos finais foram amplicons específicos de diferentes pesos moleculares para N. meningitidis, H. influenzae e gênero-específico para Streptococcus sp. A forma de visualização dos resultados foi através de eletroforese em gel de agarose para a detecção dos produtos da PCR. Determinou-se que o limite mínimo de detecção para Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae foi respectivamente de 103, 102 e 104 UFC/mL.

PALAVRAS-CHAVE: Meningites bacterianas, PCR, Limite mínimo de detecção.

INTRODUÇÃO

As meningites bacterianas continuam sendo um grande problema de saúde pública no Brasil e no mundo, constituindo importante causa de morbimortalidade na infância. Em todo o mundo, sem epidemias, um milhão de casos de meningite bacteriana são estimados para ocorrer, e dentro destes, 200.000 morrerão anualmente. O número de casos fatais varia com a idade, o tempo da doença e a espécie da bactéria causadora da infecção, mas tipicamente os casos fatais estão entre 3 a 19 % nos países desenvolvidos e 37 a 60 % nos