PCR para detecção de polimorfismos

EXTRAÇÃO DE DNA, PCR E ANÁLISE DOS GENES MYBPC3 E ACE1
ABSTRATO
Neste trabalho é aplicado o PCR enquanto técnica de diagnóstico, para a deteção de polimorfismos ao nível do intrão 16 do gene ACE1, responsável pelo aparecimento de doenças vasculares associadas à vasoconstrição, e do exão 7 do gene MYBPC3, que pode favorecer o aparecimento hipertrofia do ventrículo esquerdo, que caracteriza a miocardia hipertrófica.
Para o efeito foi extraído DNA das células do epitélio bucal, doadas por alguns alunos do P1. Posteriormente procedeu-se à realização de dois PCRs para amplificação das sequências alvo de cada gene.
Após a análise electroforética dos produtos obtidos da amplificação do gene ACE1, e da análise de uma sequenciação dos produtos da amplificação do gene MYBPC3, foram avaliados os resultados. Foi possível verificar, que no turno P1, relativamente ao gene ACE1 a maioria dos indivíduos testados são homozigóticos para a deleção. Quanto ao gene MYBPC3, foi possível averiguar a ocorrência de um polimorfismo na sequência do paciente.
INTRODUÇÃO
O método de PCR (polymerase chain reaction) foi descrito pela primeira vez por Kary B. Mullis et al. como um método de amplificação exponencial in vitro de sequências DNA conhecidas ou das quais se conhecem as regiões flanqueantes[1].
A técnica de PCR requer a presença de dois oligonucleótidos iniciadores (forward e reverse), designados de primers, que são complementares às regiões que flanqueiam a sequência a amplificar e fornecem a extremidade 3’OH livre necessária à ação da enzima que irá polimerizar a cadeia de DNA complementar. Os primers hibridam em cadeias opostas, orientando-se de forma a que a síntese de DNA ocorra entre eles e esteja limitada à sequencia desejada[2]. O desenho e a construção destes oligonucleótidos deve ser cuidadoso, de forma a que no final do PCR se obtenha de facto uma amplificação do segmento genético pretendido. Para o desenho dos primers deve-se ter em conta o seu tamanho