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UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ
DEPARTAMENTO DE PATOLOGIA E MEDICINA LEGAL
PÓS-GRADUAÇÃO EM MICROBIOLOGIA MÉDICA

REAÇÃO EM CADEIA DA
POLIMERASE - PCR
Doutoranda: Eliane dos Santos Pereira
Orientadora: Profa. Dra. Sílvia Helena Barem Rabenhorst

Definição

PCR- Reação em cadeia da polimerase

PCR - consiste em fazer cópias de DNA “in vitro”,usando os elementos básicos do processo de replicação natural do DNA.

A DESCOBERTA
Dr. Kary Banks Mullis – 1983
• 1993 - Dr Mullis recebe o premio Nobel de
Química pela sua descoberta

ETAPAS ?

Etapas do PCR
1. ADIÇÃO DE REAGENTES

TAMPÃO
DNA

Taq DNA polimerase
O nome Taq vem de Thermus aquaticus, a qual é uma bactéria encontrada sobrevivendo a altas temperaturas em geisers no Yellow Stone National Park.

PRIMERS
• São pequenos fragmentos sintéticos de DNA de fita simples de 20 a 30 bases nitrogenadas de comprimento, que são sintetizados in vitro baseado na sequência do DNA a ser amplificado.

ETAPAS DO PCR

PCR – Visualização

PCR – Visualização
Eletroforese:
Gel de agarose

PCR – Visualização
Eletroforese:

Gel de Poliacrilamida

ELETROFORESE

PCR – Rotina Médica
Detecção e subtipagem Viral
Detecção e especificidade de bactérias
Detecção de mutações
Fingerprinting – paternidade
Polimorfismo genético

POLIMORFISMO DE MICROSATÉLITES

Huntington
• A doença de Huntington esta relacionada a um padrão de mutação instável (em tandem) cujos indivíduos acometidos apresentam repetições excessivas de sequências CAG. Esse tipo de mutação pode ainda sofrer o fenômeno de antecipação. • Sr. Raimundo morreu de Huntington aos 85 anos, tendo seus sintomas começado aos 60.
Seu
filho,
Jose,
esta em franco desenvolvimento da coréia aos 45 anos. Os filhos de Jose resolveram, então, testar-se para essa doença.

Huntington
1. Qual(is) filho(s) provavelmente será(ão) acometido(s) por Huntington?
2. Qual filho apresentará essa doença de forma