Técnicas Imunológicas

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS Departamento de Imunologia

Técnicas de laboratório utilizadas em imunologia

Trabalho realizado pelas alunas Ana Carolina de Melo, Marina Piastrelli, Samanta Oliveira e Yasmin de O. Machado, para a disciplina de Imunologia básica, ministrada pela professora Maria de Fátima.

Belo Horizonte 10 de novembro de 2011
Neste trabalho serão abordados alguns métodos laboratoriais, que se baseiam na imunologia e no uso de anticorpos, para estudo de casos clínicos.

Purificação e Identificação de Proteínas
Anticorpos podem ser utilizados para purificar, identificar e caracterizar proteínas. A imunopreciptação e o Western Blotting, são dois métodos utilizados com esse fim, sendo que este último é capaz de determinar a presença e o tamanho de uma proteína.

1. Imunopreciptação

Este método utiliza um anticorpo específico para um antígeno protéico, com o intuito de isolar o antígeno da mistura.
Durante o procedimento o anticorpo é preso a uma pérola de agarose por acoplamento direto ou indireto, que é realizado pela ligação de um antianticorpo (Ex.: anti-Ig de coelho) ou por uma proteína com afinidade especifica pela porção Fc das Igs.
Ocorre então incubação com a solução de antígenos a fim de ligar as moléculas. As que não forem ligadas são separadas do complexo (partícula-anticorpo-antigeno) por lavagem. Uma alteração no pH causa o desprendimento dos antígenos específicos do anticorpo devido à alteração na afinidade.
A partir daí, os antígenos purificados podem ser avaliados por métodos convencionais.
Como alternativa, pode-se também marcar radioativamente uma pequena porção de proteínas e purificá-las, para que depois aja separação por eletroforese.

2. Western Blotting
É utilizado para determinar a quantidade relativa e o peso molecular de uma proteína dentro de uma mistura com outras proteínas ou de outras moléculas.
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