imunologia
Técnicas Imunológicas
• Testes sorológicos ou imunoensaios.
• São técnicas para a detecção de antígenos, anticorpos ou substâncias que desempenhem papel de antígenos - drogas, hormônios, ácidos nucléicos.
• Utilizam reagentes não marcados ou reagentes marcados.
• Podem ser manuais ou semi ou totalmente automatizadas. Reação antígeno-anticorpo
Sítio de ligação do Ag
Sítio de ligação do Ag
antígeno
Fab
Fc
Determinante antigênico (epítopo)
Região de dobradiça símbolo
Molécula de Ac
Sítio de ligação do Ag
Técnicas Imunológicas
Cuidados durante a execução:
• Técnicas cuidadosamente padronizadas.
• Estudo de população
• Limiar de reatividade
• Temperatura
• pH
• Tempo de incubação
• Títulos
• Conjugados
Determinação de limiar de reatividade
A – Limiar de máxima sensibilidade - triagem
B – Limiar com máximas sensibilidade e especificidade – estudos epidemiológicos
C – Limiar de máxima especificidade – diagnóstico
Um teste sorológico pode ser...
Qualitativo
Positivo
Quantitativo
Negativo
IMPORTANTE
Finalidade do teste 1.Triagem
2.Diagnóstico
?
Um teste sorológico pode ser...
Semi-quantitativo: amostra testada foi diluída – a maior diluição que apresentar reação é o seu título. Alguns fatores que afetam as medições das reações Ag/Ac
•
•
•
•
Afinidade
Avidez
Taxas Ag-Ac
Reações
Cruzadas
Anticorpos:
• Monoclonais
• Policlonais
Cronologia da resposta imunológica TÉCNICAS IMUNOLÓGICAS
• Técnicas sem uso de marcadores
– Reações de Precipitação
– Reações de Aglutinação
– Ensaios Líticos
• Técnicas com uso de marcadores
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–
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–
Radioativos (ex.: Radioimunoensaio)
Enzimáticos (ex.:ELISA)
Fluorescentes (ex.: Imunofluorescência)
Quimioluminescentes
Citometria de fluxo
TÉCNICAS IMUNOLÓGICAS:
REAGENTES NÃO MARCADOS
Técnicas com
Reagentes não marcados
• Técnicas rápidas
• Baixo custo
• Sistema