Técnicas de coloração de gran

TÉCNICAS DE COLORAÇÃO DE GRAM

INTRODUÇÃO Coloração de Gram é uma técnica de coloração para diferenciação de microrganismos através das cores, para serem observados em microscópio óptico. A técnica recebeu este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. Por volta de 1884, Hans Gram observou que as bactérias, após serem tratadas com diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas. Assim, as que ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, foram chamadas de Gram-negativas. A técnica de Gram é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo muito utilizada atualmente, como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.

OBJETIVOS Com resultados obtidos após a coloração de Gram, classificar as bactérias em Gram-positivas e Gram-negativas.

MATERIAIS * Esfregaço com Staphylococcus aureus * Esfregaço com Escherichia coli * Água destilada * Toca para cabelo * Cristal violeta * Lugol * Descorante * Fucsina * Microscópio * Óleo de Cedro

EXPERIMENTO
1 Limpeza das bancadas a. Desinfetar a bancada de trabalho no início e término da aula prática utilizando álcool 70%.
2 Esfregaço a. Preparar os esfregaços e fixá-los pela violeta. b. Cobrir os esfregaços com o cristal violeta. c. Lavar com água destilada. d. Cobrir com lugol e aguardar um minuto. e. Lavar com água corrente. f. Pingar de 3 a 4 gotas de solução descolorante. g. Lavar em água destilada. h. Cobrir os esfregaços com fucsina por 30 segundos. i. Lavar com água destilada. j. Secar delicadamente com papel filtro. k. Visualizá-los no microscópio.

RESULTADO E DISCUSSÕES Quando as estruturas celulares são cobertas pelo corante violeta-de-metila, todas se coram em roxo. Com a adição do mordente (Soluto de Lugol), ocorre à formação do complexo iodo-pararosanilina, que tem como propriedade fixar o