Tipos de coloração bacteriana
Coloração simples
Na coloração simples, o esfregaço é corado com um só reagente, de modo que todas as estruturas fiquem coradas na mesma cor. Os corantes básicos como o cromogênio carregado positivamente, são os preferidos, pois se ligam aos ácidos nucleicos e a certos componentes da parede celular.
Os objetivos desta coloração são elucidar sobre a mesma dimensão, a forma e o arranjo das células microbianas.
Os corantes básicos mais usados são o azul de metileno (cora de azul), o violeta de cristal (cora de roxo), a fucsina (cora de vermelho), o roxo de metilo (cora de roxo) e o verde de malaquita (cora de verde).
Coloração diferencial
Método de Gran
O método é baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias Gran-Positivas de reterem o corante cristal violeta durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactérias Gran-Negativas não o fazem.
A técnica consiste no tratamento de uma amostra contendo uma cultura de bactérias, com um corante primário, o cristal violeta. Uma vez que a coloração púrpura impregna todas as células, é denominada coloração primária.
Após certo período o corante púrpura é lavado e o esfregaço é recoberto com iodo. Quando o iodo é lavado, ambas as bactérias Gran-Positivas e Gran- Negativas aparecem em cor violeta escruro. A seguir, a lâmina é lavada com álcool ou uma solução de álcool acetona. Essa solução é considerada um agente descolorante que remove a cor púrpura das células de algumas espécies.
O álcool é lavado e a lâmina é então corada com safrinha, corante básico vermelho. O esfregaço é lavado novamente, seco em papel e examinado microscopicamente.
O corante purpura e o iodo se combinam no citoplasma da bactéria e a coram de púrpura. As bactérias que retêm esse essa cor após a descoloração são chamadas de Gram-Positivas e as que perdem a cor púrpura no decorrer da descoloração são denominadas Gran-Negativas. Como as bactérias Gran-Negativas não são