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Teste de Imunofluorescência indireta para HTLV

A IFI baseia-se na visualização, por meio de fluorescência, da interação dos antígenos do HTLV-I e II, presentes em linhagens celulares infectadas, com os anticorpos específicos presentes no soro. Trata-se de teste de baixo custo, simples, de alta sensibilidade e especificidade.

· etapa 1, células MT2, infectadas pelo HTLV-I, ou células CL19, infectadas pelo HTLV-II, são fixadas em lâminas de vidro com regiões demarcadas;

· etapa 2 é adicionada a amostra diluída que, sendo reagente, possui anticorpos específicos, que se ligarão aos antígenos dos vírus HTLV-I ou II, presentes nas lâminas;

· etapa 3, adiciona-se o conjugado composto de uma anti-imunoglobulina humana ligada ao isotiocianato de fluoresceína, que servirá como revelador da reação antígeno e anticorpo;

· etapa 4, a reação antígeno/anticorpo é evidenciada por meio de fluorescência. Deve-se padronizar cuidadosamente a reação, dispor de um bom microscópio de fluorescência e profissionais adequadamente treinados para a correta interpretação dos resultados.

Materiais necessários para executar a reação de IFI
Materiais dornecidos:
· lâminas de imunofluorescência contendo células infectadas com o HTLV-I ou HTLV-II
· soro-controle positivo
· soro-controle negativo
· anti-imunoglobulina humana conjugada com fluoresceína
· glicerina tamponada a pH = 9,0 ± 0,5
· Azul de Evans 0,1%
Materiais não fornecidos
· tampão fosfato salinado PBS pH=7,2
· microplacas ou tubos para diluições
· pipetas manuais de volumes ajustáveis
· ponteiras descartáveis para pipetas manuais
· câmara úmida
· cubas para lavagem de lâminas (tipo Koplin)
· equipamentos de proteção individual; luvas, máscaras, óculos e avental ou jaleco
· água destilada
· lamínulas de 24 x 50 mm
· vidraria para preparo de reagentes
· estufa a 37°C
· microscópio para fluorescência
· recipientes apropriados, com hipoclorito de sódio a 2% para descarte de material potencialmente