Salting Out

Análises Clínicas e Saúde Pública
Biologia Molecular I
Extração de Ácidos Nucleicos - Salting out
Isolamento de Ácidos Nucleicos de diversos líquidos biológicos: urina, folículos capilares, mucosa bucal e sangue total. Extração de ácidos nucleicos: DNA Humano

Data de Realização:25/03/2015 Data de entrega:08/04/2015

Índice

Introdução 3
Material utilizado 4
Extração de Urina 4
Extracção da mucosa bucal 5
Extração de folículos capilares 7
Extracção de sangue 7
Conclusão 8

Introdução

Este trabalho teve como principal objectivo estudar um dos métodos de extracção de ácidos nucleicos, o salting out ou precipitação por sais caracterizado por ser um processo no qual as substâncias solúveis em água são excluídas da fase aquosa pela adição de sais. Os sais têm a capacidade de desidratar as proteínas, possibilitando a entrada de moléculas de água para o meio e diminuindo a sua concentração nas proteínas. Este processo depende também da solubilidade das mesmas. Assim, quanto maior aumento da força iónica das proteínas, mais facilmente ocorre precipitação das mesmas. A extracção e o isolamento de DNA é um procedimento básico e fundamental para a biologia molecular. O salting-out é uma das várias técnicas que permite obter DNA. Foi neste método que nos baseamos para extrair o DNA da urina, dos folículos capilares, da mucosa bucal e ainda do sangue total. É por isso de elevado interesse que se perceba sucintamente como esta técnica se processa. Este método baseia-se em cinco acontecimentos que decorrem com a técnica. A lise que consiste na dissolução da membrana plasmática, na desnaturação das proteínas e do DNA e ainda na hidrólise de RNA; A precipitação de proteínas que ocorre devido à incorporação de NaCl 6M e à centrifugação que permite separar sedimento de membrana e proteínas de DNA; A precipitação de DNA que é conseguido devido ao isopropanol ou