Cancer de mama

FACULDADES METROPOLITANAS UNIDAS

Biologia Molecular

Relatório de práticas em técnicas de Biologia Molecular

Carlos Cesar Alves da Costa

Rafael de Moraes Petecof

Introdução

Para extrair DNA de sangue, este deve ser centrifugado e lavado repetidas vezes com tampão TE (LIMA et al, 2009). Procedimentos de extração de DNA de sangue envolve, primeiramente, a separação dos leucócitos, formando um pellet destes por centrifugação. Subsequentes procedimentos objetivam lizar leucócitos e precipitar proteínas, precipitar DNA, lavar DNA e por fim hidratar o DNA (CABOUX et al, 2012).

Proteinase K e solventes orgânicos são frequentemente usados para extrair DNA (BAREA et al, 2004). A extração de DNA com fenol-clorofórmio resulta em melhores amostras de DNA (ABRÂO et al, 2005).

Embora seja comum o uso de leucócitos periféricos para se extrair DNA, a extração também pode ser feita a partir de células da mucosa oral como alternativa às amostras sanguíneas (ABRÂO et al, 2005). As células de epitélio bucal podem ser obtidas por raspagem da mucosa das bochechas, através de algodão estéril em uma haste (BAREA et al, 2004).

Para determinar a pureza de DNA verifica-se o índice de absorbância da amostra em comprimento de onda de 260 nanômetros, para o DNA, e divide-se pelo índice de absorbância da amostra em 280 nanômetros de comprimento de onda, para proteínas (ROSA, 2008).

Objetivo

O objetivo dos experimentos foi extrair material genético (DNA) a partir das amostras de sangue periférico e epitélio bucal, assim como analisar se houve a extração dos ácidos nucléicos através da eletroforese. Comparar os resultados: Salting-out com clorofórmio (leucócitos) e salting-out sem clorofórmio (leucócitos e células de epitélio bucal).

Materiais e métodos

Quanto aos métodos foram testados dois protocolos para