pratica de bioquimica

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Disciplina de Bioquímica I – Curso Prático
Depto. Genética e Evolução – UFSCar
Profa. Dra. Maria Teresa Marques Novo Mansur/ Profa. Dra. Ana Paula Felicio Novello

PRÁTICA 1 : Estudo Qualitativo da Amilase Salivar
Introdução:
A digestão salivar se realiza através da ação da enzima amilase salivar, também chamada ptialina, que hidroliza o amido até a formação de açúcares de cadeia pequena como dissacarídeos. Para a realização da hidrólise do amido são necessárias certas condições adequadas, tais como pH e temperatura. Certos íons podem ainda ativar ou inibir a atividade enzimática.
Para se acompanhar a hidrólise enzimática do amido pela amilase utiliza-se lugol (iodo/ iodeto de potássio), o qual reage com o amido, conferindo cor azul à solução. A coloração azul evidencia a presença do reagente, ainda não hidrolisado.
Define-se como ponto acromático o ponto em que os fragmentos da molécula do amido não formam mais o referido composto com o iodo.

1. Determinação do ponto acromático
Transfira para um béquer um pouco de saliva. Pipete 2 ml dessa saliva para uma proveta de 25 ml. Dilua para 20 ml com tampão fosfato (pH 6,8)
(solução 1:10). Homogenize bem a solução, agitando gentilmente.
Preparar previamente 12 tubos de ensaio contendo cada um 1 gota de solução de lugol.
Colocar 25 ml de solução de amido 1% em béquer ou Erlenmeyer de 50 ml. Adicionar 1 ml da solução de saliva 1:10, agitar e começar a marcar o tempo. Coletar imediatamente 0,5 ml dessa solução (tempo~ zero) e transferir para um dos tubos de ensaio contendo a solução de lugol. Agitar.
A cada minuto de incubação repetir a retirada da alíquota e adicionar a cada um dos tubos com lugol. Retirar as alíquotas durante 10 minutos e comparar cada teste com um tubo-controle contendo 0,5 ml de água e 1 gota de lugol (ponto acromático).
Retirar uma alíquota após 15 minutos e, se o ponto acromático não tiver sido atingido, após 30 minutos. Compare o seu resultado com o de outros