Bioquimica pratica

TRABALHO PRÁTICO Nº 1

CROMATOGRAFIA DE AMINOÁCIDOS EM PAPEL

A - OBJETIVOS ESPECÍFICOS

No final deste trabalho prático o estudante deverá saber :

01-Preparar um sistema adequado para a execução experimental de cromatografia de aminoácidos.
02-Fazer a aplicação de aminoácido no papel de filtro.
03-Executar com precisão as operações necessárias à cromatografia ascendente.
04-Revelar um cromatograma.
05-Identificar aminoácidos de um cromatograma calculando seu Rf-.
06-Ordenar solventes empregados em cromatografia de aminoácidos baseado em sua polaridade.
07-Definir coeficiente de partição, fase móvel , fase fixa.

B - MATERIAL NECESSÀRIO

-1 tubo de ensaio de 25 x 200 mm com uma rolha de cortiça com percevejo - papel de filtro Whatman nº1 , em tiras de 17 x 170 mm - tubos capilares -1 forro de papel - lápis e régua - estufa a 90-100ºC -2 placas de petri

C - REAGENTES

Mistura de três aminoácidos padrões (+ou- 0,2 M ) Mistura de dois aminoácidos desconhecidos (+ou- 0,2 M ) Solvente : mistura butanol – ácido acético – água ( 4: 1: 2 ) Revelador : solução de ninidrina 0,25 N em acetona.

D - PROCEDIMENTO

IMPORTANTE: Em todas as operações abaixo evitar tocar no papel filtro com os dedos. Contaminações aparecerão, como manchas que prejudicarão o resultado da cromatografia. A dupla de estudantes deverá executar as duas partes ( I e II ) em paralelo.

I – CROMATOGRAFIA DE AMINOÁCIDOS PADRÕES

1. Em uma das extremidades da tira de papel de filtro, a uma distância de 25 mm traçar a lápis uma transversal como referência para o ponto de origem.
2. Tocar com a ponta do tubo capilar contendo a mistura de três aminoácidos padrões, o meio da linha transversal traçada ( ponto de origem ), deixando escoar um pouco da mistura, evitando que a mesma se espalhe por uma área maior que 5 mm. Secar.
3. Repetir a mesma operação por duas vezes, tendo o cuidado