Metodologia Bacteria

1. METODOLOGIA

1.1. ATIVAÇÃO DAS CEPAS BACTERIANA

Para manipulação das culturas puras de bactérias, as mesmas foram submetidas a uma série de operações fundamentais com objetivo de reavivar e/ou ativar as células bacterianas para posteriormente serem cultivadas. Os meios mais comumente usados e trabalhados para o estudo dessas características culturais são: ágar nutritivo em placa, ágar nutritivo inclinado, meio de gelatina nutritiva em camada alta, e caldo nutritivo (SOARES, 1991 p. 60). Dentre esses meios foram exploradas meio ágar nutritivo em placas e caldo nutritivo.

1.2. PREPARAÇÃO DO MEIO DE CULTURA /PLATE COUNT AGAR- PCA

Com objetivo de reavivar as culturas bacterianas, foram preparadas 120mL de meio Plate Count Agar- PCA para cada cultura pura de bactérias. Para atingir a homogeneidade desses meios, as soluções foram solubilizadas sob temperatura e agitação magnética, e posteriormente esterilizadas em autoclave sob 121°C por 15min. Foram distribuídas as soluções em placas de Petri e conservadas em freezer sob temperatura de refrigeração de + 4°C por 12horas.

1.3. PREPARAÇÃO DE CALDO NUTRITIVO/ LACTOSADO

Com intuito de explorar e resgatar uma maior quantidade de células bacterianas, foram preparadas 120mL de meio nutritivo Lactose Broth , solubilizados em H2O(d) sob agitação magnética, esterilizadas em autoclave sob temperatura de 121°C por 15 min. E posteriormente distribuidas em 18 tubos de ensaio e conservadas em freezer por 12horas. 2. TÉCNICA ASSÉPTICAS E SEMEADURA DE MICRORGANISMOS

Para analisar, explorar o isolamento, crescimento e cultivo bacteriano, as culturas puras de bactérias trabalhadas foram manipuladas em padrões assépticas adequadas por técnicas especiais de semeadura com o objetivo de preservar a pureza do cultivo e minimizar os riscos de contaminação em geral. As técnicas de semeaduras trabalhadas foram: Inoculação bacteriana por estriamento em placas e inoculação bacteriana em tubos.

2.1 INOCULAÇÃO