HPLC

Introdução
A cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) é uma técnica em que a fase móvel é eluída sobre altas pressões em uma coluna pequena e recheada. Com a CLAE é possível analisar diversos tipos de compostos presentes em amostras de maneira rápida, além de ter alta resolução e sensibilidade. Para que fosse atingida a eficiência atual da CLAE, foram necessários diversos avanços tecnológicos para cada componente do cromatógrafo. Foram necessários equipamentos que suportem altas pressões e também novas técnicas para rechear colunas com partículas cada vez menores e homogenias, necessárias para obter alta resolução.
Há cinco tipos de mecanismos diferentes que determinam as separações cromatográficas, estes caracterizam as seguintes técnicas: Cromatografia por adsorção (CLS), cromatografia por partição (CLL), cromatografia líquida com fase ligada (CLFL), cromatografia por troca iônica e cromatografia por exclusão. Pode-se variar entre elas apenas com a troca da coluna e da fase móvel.
As colunas em CLAE geralmente são construídas com aço inoxidável, têm comprimento entre 10 e 50 cm, e são geralmente retas para evitar perda de eficiência. As fases estacionarias em são compostas por recheios classificados como sólidos rígidos, semi-rígidos ou não rígidos; partículas porosas ou peliculares ; partículas esféricas ou irregulares; e partículas com diferentes diâmetros. Em relação às fases móveis, deve-se ter atenção principalmente com a viscosidade, polaridade, miscibilidade e compatibilidade com o detector.
O sistema de bombeamento deve apresentar uma vasão razoável e constante e os detectores usados em CLAE são: Detector espectrofotométrico, detector por índice de refração, detector por fluorescência e detector eletroquímico.
A CLAE possui algumas vantagens contra a CGAR, dentre elas que a amostra deve ser apenas solúvel na fase móvel e pode-se ter maior variedade de possíveis mecanismos para separação.