Hplc

CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA – CLAE (HPLC)

ELAINE LOPES
JULHO/2012

INTRODUÇÃO A CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
CROMATOGRAFIA

Vem do grego “CHROMA”, que significa “COR”

Vem do grego “GRAPHE”, que significa “ESCREVER”

Métodos cromatográficos, de uma forma geral, permitem a separação, quantificação e identificação de espécies químicas, ENTRETANTO a Cromatografia Líquida é uma técnica de separação de grande resolução, mas não identifica com precisão o composto.

INTRODUÇÃO A CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
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Entre as vantagens desta técnica  Diversidade de suas aplicações;
Desvantagens  custo dos equipamentos, tempo para formação de um técnico ; Uma expressão usada é que “os tempos de retenção são característicos, porém não são exclusivos”. Emprega-se outras técnicas  espectrometria de massas, espectrometria de infravermelho ou ressonância magnética;

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INTRODUÇÃO A CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
Princípio da Técnica
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Separação  pela distribuição destes componentes em duas fases que se

encontram em contato;
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Durante a passagem da fase móvel pela estacionária, os componentes da

mistura são seletivamente retido pela fase estacionária;
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A retenção seletiva pode operar por mecanismos entrópicos e entálpicos.

CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
Tipos
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Cromatografia Líquida Clássica  colunas de vidro; Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) ou High Perfomance Liquid Chromatography (HPLC)  auxílio de uma bomba de alta pressão;

CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
Classificação pelos mecanismos de separação

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Adsorção-Cromatografia Líquido-sólido  Competição pelos sítios ativos da fase estacionária; Partição-Cromatografia líquido-líquido  Baseada nas diferenças de solubilidade dos componentes; Troca iônica  Diferentes tendências dos componentes iônicos da amostra a permutar com os íons da fase estacionária;

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Exclusão  Os componentes são separados conforme o tamanho efetivo das
moléculas.