HPLC

Cromatografia
Líquida de Alta
Eficiência
Carla B. G. Bottoli
Instituto de Química
UNICAMP

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
(HPLC)
É uma técnica cromatográfica que utiliza como FM um líquido e equipamentos sofisticados para separar os componentes de uma amostra pela interação com a FE e com a FM.
Utiliza-se colunas metálicas e FM pressurizada, obtida com auxílio de bombas de alta pressão, para permitir uma vazão mais rápida da FM.
É também conhecida como HPLC, ou de Alta Velocidade, ou de Alta Pressão ou de Alto Desempenho ou, ainda, de
Alta Performance. Do Inglês HPLC – High Performance
Liquid Chromatography

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
Vantagens
FE é utilizada várias vezes.
Versatilidade: único requisito é a solubilidade da amostra na FM.
Tempo reduzido de análise.
Alta resolução.
Boa para análise qualitativa:
Parâmetros para identificação: tR, espectro de absorção no UV (detector de arranjo de diodos), espectro de massas

Bons resultados quantitativos: desvios inferiores a 5%.
Boa detectabilidade:
Absorção UV-Vis de λ variável: 10-10 g;
Fluorescência: 10-12 g.

Automação.

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
Desvantagens
Alto custo do equipamento.
Alto custo de manutenção do equipamento.
Não existe um detector universal com boa detectabilidade e baixo custo:
Índice de refração: baixa detectabilidade (10-6 g), pouco estável. Espectrômetro de massas: ~ US$ 150.000
Experiência do operador.

Aplicabilidade de HPLC
Requer somente que a amostra seja solúvel na fase móvel.

Toxicologia

Aminoácidos

Pesticidas

Corantes
Polímeros

Cosméticos

Fármacos

Proteínas

Alimentos

Vitaminas

Sistema de HPLC

Instrumentos Comerciais

Instrumentos Comerciais

Sistema de HPLC

Reservatório para Fase Móvel
Bomba

Filtro do Reservatório:
Captar a FM e evitar que partículas suspensas na FM obstruam os capilares ou contaminem a bomba.
Filtros de 10 a 40 µm.