Eletroforese

UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA
Centro de Ciências Biológicas e da Saúde
Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular
BQI 202- Laboratório de Bioquímica I

Relatório

Eletroforese de ácidos nucléicos em gel de agarose

Viçosa-MG
Janeiro -2013

Introdução:
A análise de DNA e RNA por eletroforese é uma técnica que é baseada no fato de moléculas de DNA e RNA possuírem carga negativa em valores de pH neutro ou alcalino, e quando aplicado ou imerso em uma matriz de gel submetida a um campo elétrico, migra em direção ao pólo positivo. A velocidade da migração depende do tamanho da molécula, por isso encontramos diferentes pontos na matriz.
O tipo de matriz que é usada é relativo, pois depende do tamanho dos fragmentos de DNA que se pretende separar e analisar. O gel de agarose normalmente é usado para a separação de fragmentos, que podem variar de 0,2 Kb a 50 Kb (1 Kb equivale 1000 pares de bases). E para fragmentos pequenos, de até 1 Kb usamos o gel de poliacrilamida.
O gel de agarose é preparado apenas da mistura de um tampão e agarose, não apresentando toxidade. A polimerização é rápida e o gel pode ser reciclado após o uso. Além disso, a eletroforese em gel de agarose pode ser usada como método analítico ou preparativo, isto é, o fragmento de DNA é recuperado e purificado a partir do gel. Porém, dependendo do método usado para a visualização do DNA, o gel de agarose pode ser desvantajoso. Com grande freqüência se utiliza a coloração brometo de etídeo (EtBr), uma substância mutagênica. Em adição, para a visualização do DNA corado com EtBr, é necessário a utilização de transluminador de luz UV.
Objetivos:
Preparar gel de agarose 0,8%;
Conhecer os fatores que afetem a eletroforese em gel de agarose;
Analisar o padrão de bandeamento em função dos ácidos nucléicos presentes na amostra.
Materiais e métodos
Para realização dessa prática foram necessários:
Transluminador
Fonte de alimentação
Micro-ondas
Cubas de