Determinação da concentração proteica

Determinação da concentração proteica
(Relatório)

Ana Pinto nº 24010
Duarte Oliveira nº 24016
Stéphanie Pais nº24201
Introdução

Os métodos espectroscópicos baseiam-se na absorção e/ ou emissão de radiação electromagnética por muitas moléculas, quando os seus electrões se movimentam entre níveis energéticos. A espectroscopia baseia-se na absorção da radiação nos comprimentos de onda entre o ultra violeta e o infravermelho.
A chamada radiação luminosa corresponde a uma gama de comprimentos de onda que vai desde o ultra violeta ao infra vermelho no espectro da radiação electromagnética.
Um espectrofotómetro é um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromática através de uma solução, e mede a quantidade de luz que foi absorvida por essa solução, permite-nos saber que quantidade de luz é absorvida em cada comprimento de onda.
O conjunto das absorvências dos vários comprimentos de onda para um composto chama-se espectro de absorção e varia de substância para substância, a espectrofotometria permite-nos, por exemplo, identificar substâncias com base no seu espectro como também quantificá-las, uma vez que a quantidade de luz absorvida está relacionada com a concentração da substância.
A absorção da luz é tanto maior quanto mais concentrada for a solução por ela atravessada;
A absorção da luz é tanto maior quanto maior for a distância percorrida pelo feixe luminoso através das amostras.
Juntando estes princípios temos a lei de Lambert– Beer: Abs = E. b. c

A absorvência da luz a cada comprimento de onda é directamente proporcional à concentração da solução contida na couvette. Esta linearidade deixa de ocorrer a concentrações muito elevadas da substância, podendo nestes casos diluir previamente a amostra a medir.
Com alguma frequência é necessário quantificar substâncias em misturas complexas, ou que não absorvem significativamente a luz a nenhum comprimento de onda. Nestes casos utilizam-se os chamados métodos colorimétricos, o composto a