Determinação quantitativa de proteínas

Bioquímica I

Trabalho realizado pelos discentes: Hugo Martins Joana Monteiro Margarida Silva 1º ano

Dezembro 2012

Resumo
O plasma, parte líquida do sangue, é formado por diversas substâncias, de entre as quais algumas são proteínas. Estas proteínas são geralmente divididas em três grupos principais: albumina, globulina e fibrinogénio.
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Com esta atividade experimental pretendeu-se quantificar as proteínas presentes no plasma sanguíneo utilizando dois métodos, o método do biureto e o método de Warburg e Christian, também conhecido por método direto. Dividiu-se então a experiência em duas partes, sendo a primeira correspondente ao método do biureto e a segunda ao método direto. Na primeira parte prepararam-se inicialmente diluições de solução de albumina que foram utilizadas para a preparação de uma segunda série de tubos de ensaio. Após a incubação destes tubos leu-se a absorvância das soluções através do espectrofotómetro. Com os dados obtidos e as respetivas concentrações foi possível construir a curva de calibração, que relaciona a concentração da proteína com a sua absorvância. Esperase que nesta curva quanto menor for a absorvância da amostra menor seja a sua concentração, logo quanto mais diluída for a solução menor será a sua absorvância e vice-versa.
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Na segunda parte o procedimento foi mais rápido e mais “económico”, uma vez que se utiliza muito menos amostra. Diluiu-se o plasma numa solução salina fisiológica, soro fisiológico, na proporção 1:100, de seguida utilizou-se o espectrofotómetro para determinar a absorvância, utilizando dois comprimentos de onda, 260nm e 280nm, e por fim aplicaram-se os coeficientes de Warburg e Christian para determinar a concentração proteica da nossa amostra.
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A concentração proteica a determinar deve estar contida entre os 50mg/ml e 3000mg/ml.
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Índice
I. Introdução .................................................................................................. 1 II. Método do Biureto