Quantificação de proteínas pelo método de lowry

Quantificação de proteínas pelo método de Lowry

RESUMO

O método de Lowry tem como objetivo determinar a concentração de proteínas numa solução com o reagente colorimétrico Folin Ciocalteau. Em condições alcalinas esta substância interage com as proteínas da amostra gerando um complexo de cor azul que pode ser medido num espectrofotômetro no comprimento de onda de 750 nm. A técnica é bastante sensível, apresentando várias desvantagens em relação a outros métodos colorimétricos. No experimento realizado, elaborou-se uma curva padrão com albumina de soro bovino (BSA) a 5 mg/mL como solução padrão, onde obteve-se um fator de calibração médio para calcular a concentração de proteínas na amostra. Utilizou-se leite integral diluído para a quantificação protéica. Em razão de o leite integral possuir grande quantidade de lipídios, a leitura das absorbâncias não foi satisfatória, pois estas biomoléculas podem ter desviado a luz absorvida.

INTRODUÇÃO

Quantificação de proteínas por espectrofotometria de absorção

A espectrofotometria de absorção permite quantificar no espectrofotômetro a quantidade de luz absorvida (absorbância) das proteínas e, consequentemente, medir a concentração dessas biomoléculas em determinado meio. Segundo a lei de Lambert-Beer, a absorbância é diretamente proporcional à concentração da amostra quando uma faixa de luz monocromática atravessa a solução.
A determinação da concentração de proteínas em uma solução por espectrofotometria envolve a comparação da absorbância da solução estudada a uma solução padrão, onde a concentração já é conhecida. Com os valores de absorbância e de concentração definidos, pode-se traçar uma curva padrão. Neste gráfico se observa uma linearidade, que indica a proporcionalidade entre o aumento da absorbância e da concentração de proteínas. A curva padrão serve de base para a análise da amostra desconhecida, pois com ela obtém-se o fator de calibração médio (FCM), que servirá de base para o cálculo da