Coloração de Gram e Meio de Cultura

Meio de Cultura e Coloração de Gram

Meio de Cultura

Materiais
Espátula
Balança analítica
Proveta plástica de 1000 ml
Balão de fundo chato
Meio de cultura: Ágar Mueller Hinton
300 ml de água destilada
Placa de petri
Alça
Gase
Autoclave
Bico de bunsen
Swab

Método
Pesar 11,4g de Ágar de Mueller Hinton na balança analítica.
Diluir o Ágar no balão de fundo chato com 300 ml da água destilda.
Tampar o balão com gaze e levar para a Autoclave, assim que der pressão, deixar por 15 minutos a 120ºC.
Distribuir nas placas de petri e esperar ficar sólido. Com o swab, faz-se o esfregaço nas mãos (mãos lavadas com sabão, mãos lavadas com alcool gel e mãos sem lavar). Transfere em zig zag para a placa com o meio de cultura, fazer a estria e a semeadura com a alça. Colocar na estufa em uma temperatura de 37ºC por 24 horas.

Coloração de Gram

Materiais
Lâmina
Lamínula
Pipeta Pasteur
Tubo de ensaio contendo água destilada
Alça
Meio de cultura contendo colônias de bactérias
Bico de Bunsen
Óleo de imersão
Violeta Genciana
Lugol de Gram
Álcool/Acetona
Fucsina de Gram

Metodologia
Identificar a lâmina
Pegar uma gota de água destilada e por na lâmina com a pipeta Pasteur.
Com o Bico de Bunsen, esterilizar a alça, pegar um pouco da colônia e fazer o esfregaço na lâmina (diluição de bactérias).
Esperar secar (fixar), fazer a coloração de gram usando:
Violeta Genciana, deixar por 1 minuto, depois lavar com água.
Lugol de gram, deixar por 1 minuto, depois lavar.
Descorar com Álcool/Acetona, por 10 segundos, depois lavar.
Fucsina de Gram, por 30 segundos, lavar e secar.
Observar em imersão (100x).