bacterias

Coloração de microrganismo – coloração gram
Materiais
Corantes, reagentes e soluções;
Cristal violeta 2 %;
Lugol;
Safranina 0,25%;
Álcool –cetona ou álcool etílico 95%;
Solução salina fisiológica estéril.
Equipamentos e utensílios:
Microscópio óptico;
Bico de busen;
Alça de inolulação;
Laminas para microscopia;
Pinça;
Lenços de papel absorvente;
Óleo de imersão.
Introdução
A coloração de Gram está baseado as diferença das paredes celulares das diversas bactérias e como estas serão coradas de forma distinta.
As bactérias denominadas Gram negativas possuem uma fina camada de glicoproteína recoberta por uma espessa camada formada principalmente por lipoproteínas e substâncias lipídicas. Já as consideradas Gram positivas possuem uma única e espessa camada de glicoproteína.
Antes de começar a coloração, é necessário fazer um esfregaço, pegar uma colônia isolada ou uma alçada de uma cultura pura e transferir para uma lâmina limpa. Quando se utilizada uma colônia, deve-se adicionar uma gota/alçada de solução salina a 0,9%, homogeneizando-a. É importante que o esfregaço seja bem preparado, para que no final da coloração, seja possível a visualização das bactérias. Também é importante não esquecer de fixar o esfregaço na chama do Bico de Bunsen, para evitar que a massa de células a ser analisada se perca durante as etapas da coloração. Na primeira etapa da coloração, o corante violeta é adicionado sobre o esfregaço. O corante, penetra na parede da bactéria, independente se esta é Gram positiva ou Gram negativa. Ao adicionar o lugol, este se combina com o corante Cristal Violeta, formando um grande complexo, o Cristal Violeta-Iodo , que se fixa no corante na parede a bactéria.
O álcool tem papel fundamental neste método. Ao ser adicionado sobre o esfregaço corado com o Cristal violeta vai diferenciar as bactérias: as Gram positivas, com sua parede rica em complexas cadeias de peptidoglicano serão desidratadas, e os poros na parede serão reduzidos,