coloração de gram

Técnica de Coloração de Gram

A técnica de coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial que permite distinguir os dois principais grupos de bactérias por microscopia óptica.
Foi descoberta pelo físico dinamarquês Hans Christian Gram em 1884. Este cientista obteve com a coloração realizada uma melhor visualização das bactérias em amostras de material infectado. Verificou, no entanto, que nem todas as bactérias coravam com este método o que o levou a sugerir a possibilidade de ser usado um contrastante. Gram morreu em 1935 sem ter conseguido que fosse reconhecida a devida importância ao seu método de coloração. Atualmente, esta técnica é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo utilizada como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.
A técnica de coloração de Gram é um dos procedimentos mais úteis, pois classifica as bactérias em dois grandes grupos: gram-positivas e gram-negativas.

A técnica de coloração de Gram consiste em expor as células bacterianas à seguinte sequência:

1. Aplicação do corante púrpura
2. .Aplicação do lugol
(mordente)
3. Lâmina lavada com álcool (descoloração)
4. Lâmina corada com safranina (contracorante)

1. Um esfregaço fixado pelo calor é recoberto com um corante básico púrpura, normalmente a violeta de genciana. Uma vez que a coloração púrpura impregna todas as células, é denominada coloração primária.
2. Após um curto período, o corante púrpura é lavado e o esfregaço é recoberto com o lugol (à base de iodo). Quando o iodo é lavado, ambas as bactérias gram-positivas e gram-negativas aparecem em cor violeta escuro ou púrpura.
3. A seguir, a lâmina é lavada com álcool ou uma solução de álcool-acetona. Essa solução é um agente descolorante, que remove o púrpura das células de algumas espécies, mas não de outras.
4. O álcool é lavado, e a lâmina é então corada com safranina, um corante básico vermelho. O esfregaço é lavado novamente, seco com papel e examinado