Coloração de gram

Introdução:

Coloração de Gram é uma técnica de coloração que permite visualizar, com o auxílio de um microscópio, micróbios corados. A técnica recebeu este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram, que por volta de 1884 observou que as bactérias, após serem tratadas com diferentes corantes, adquiriam cores diferenciadas. Assim, as que ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, foram chamadas de Gram-negativas. A técnica de Gram é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo muito utilizada atualmente, como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.

Objetivos:

• Apresentar a seqüência dos procedimentos da coloração de Gram e os princípios físico-químicos que regem cada um desses procedimentos.

• Diferenciar as bactérias gram-positivas das gram-negativas através do método de Gram.

• Explicar por que bactérias com componentes estruturais diferentes podem ser diferenciadas quando coradas pelo método de Gram.

• Apresentar provas da existência de microorganismos intimamente associados aos tecidos de nosso corpo.

Materiais:

• Hastes flexíveis com ponta de algodão hidrófilo (cotonetes);
• Lâminas de vidro para microscopia;
• Caneta para escrever em vidro;
• Solução de cristal violeta;
• Solução de iodo, conhecida como solução de Lugol;
• Álcool a 95º GL;
• Solução de fucsina;
• Recipiente ou suporte descartável para recolher os resíduos de corante (lata de achocolatado);
• Frasco com água;
• Vela acesa;
• Papel higiênico;
• Microscópio óptico com lente objetiva com capacidade de aumento de 100 vezes;
• Óleo mineral.

Metodologia:

Esfregue firmemente a ponta de algodão de uma haste flexível na gengiva e, com este material, faça um esfregaço no centro de uma lâmina de vidro, previamente desengordurada e marcada na face contrária àquela onde o esfregaço será feito, conforme as Figuras 1 e 2.

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Fig. 1 – Coleta de