Caracterização de Proteínas e Enzimas

1 INTRODUÇÃO

1.1 REAÇÃO DE BIURETO
As substâncias que contêm duas ou mais ligações peptídicas dão reação de Biureto positiva (tripeptídeos, oligopeptídeos e proteínas). O íon cobre fornecido por uma solução diluída e alcalina de CuSO4 se complexa com os grupos aminos das ligações peptídicas desenvolvendo uma coloração violeta. O composto formado pode ser representado como: 1.2 REAÇÃO DE NIHIDRINA

1.3 REAÇÃO DE ESPECIFICIDADE DA ENZIMA – SUBSTRATO
Caracterização da enzima urease.
A urease é uma enzima que catalisa a hidrólise da uréia em amônia e dióxido de carbono.
A atividade da enzima pode ser verificada pela formação do carbonato de amônio, que é um sal básico e cuja presença pode ser revelada por meio de um indicador ácido-básico como o vermelho de fenol (VF). Este, em meio básico é rosa e em meio ácido ou neutro é amarelo. Portanto, se a reação de hidrólise da uréia pela urease ocorre, observa-se uma coloração rosa. A urease existe em algumas bactérias e plantas e pode ser extraída com facilidade da soja (Glycinemax).

2 objetivo
2.1 Caracterizar a presença de proteínas em material biológico através da reação de Biureto; Demonstrar a especificidade enzima-substrato.
2.2 Demonstrar a presença de aminoácidos através da reação de Nihidrina.
Caracterizar a presença de proteínas em material biológico através da reação de Biureto.
Demonstrar a especificidade enzima-substrato.
2.3 Verificar a atividade específica da enzima urease; Comprovar experimentalmente a destruição da urease pelo calor;
3 materiais

- tubos de ensaio;
– suporte para tubos de ensaio;
– suporte para pipetas;
– reativos;
– roteiro de aula prática.
4 métodos
4.1 Reação de biureto
1. Nomeamos dois tubos entre A e B
2. No tubo A colocamos 1mL de proteína com a pipeta de 0,5mL de NaOH(2,5N) e CuSO4
3. No tubo B colocamos 1mL de H2O, 0,5mL de NaOH (2,5N) e 0,5mL de CuSO4
4. O tubo a ficou violeta e o B azul

4.2 REAÇÃO DE NIHIDRINA
1.