Western Blot

POP - PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO Western Blot (Sistema BioRad) 12-04-2012 1.0 – Processamento da amostra 1. Colocar um 0,03g de aorta em 200 µL tampão de extração RIPA com inibidores (final do POP) e triturar no Politron, depois deixar neste tampão por no mínimo 1 hora sob agitação a 4ºC, para extrair as proteínas. Centrifugar a 13.000 rpm por 10 min. Recolher o sobrenadante que poderá ser congelado (80ºC) e utilizado posteriormente; 2. Após este procedimento dosar a quantidade de proteínas das amostras pelo método de Bradford. 2.0 – Preparo dos géis O tamanho da proteína a ser avaliada determinará a porosidade do gel de separação SDS/PAGE: Tamanho da protein (kDa) Porcentagem do gel 4-40 20 12-45 15 10-70 12,5 15-100 10 25-200 8 1. Separar as placas, pente(s) e espaçadores a serem utilizados na preparação do gel. O pente escolhido deve ter a mesma espessura dos espaçadores selecionados; 2. Lavar e secar as placas, pente(s) e espaçadores; 3. Colocar os três espaçadores sobre a placa 01 deixando um espaço nas extremidades. Placa 01 Placa 02 4. Certificar-se de que apareceram as 2 pontas do espaçador inferior para fora do conjunto das placas; 5. Colocar a placa 02 sobre a placa 01 e prender com os grampos (2 de cada lado, com exceção do lado superior); 6. Verificar se o pente escolhido se encaixa por entre as placas; 7. Retirar a agarose do…

Práticas de Fabricação (BPF) - instalações adequadas e validadas, equipamentos calibrados, validados e dedicados por linha de produção, insumos certificados, documentação do processo produtivo lote a lote (dossiê de produção), uso de procedimentos operacionais padronizados (POP) em todas as atividades relacionadas à produção, pessoal qualificado e permanentemente submetido a treinamentos entre outras. O produto deve estar registrado pela autoridade regulatória, que no Brasil é a…

uma fluorescência mais evidente, pelo fato do anticorpo fluorescente se ligar apenas aos anticorpos primários. Outra vantagem é que por esta técnica pode-se trabalhar com vários anticorpos primários específicos para diferentes tipos de antígenos e pode-se identificar qual a classe que o anticorpo pertence. A técnica de imunofluorescência por sanduíche recebe este nome porque o antígeno fica entre dois anticorpos. Esta técnica é aplicada para estudar tecidos linfóides e descobrir que…

literária de Cazuza, ao lado de Clarice Lispector (cujo "A descoberta do mundo" tornou seu livro de cabeceira), Kerouac também teve um poema transcrito na contracapa do disco seguinte. Lançado em março de 1987, "Só se for a dois" foi o primeiro álbum de Cazuza fora da Som Livre, que resolvera dissolver o seu cast. Disputado por várias gravadoras, ele se transferiu para a Polygram, a conselho do pai. A essa altura, apesar da imagem de artista "louco", sua postura profissional já era…

diagnóstico de várias doenças infecciosas uma vez que vários agentes patológicos induzem a produção de anticorpos (imunoglobulinas) por parte dos linfócitos B do sistema imunológico humoral humano. Este é o teste de primeira linha no diagnóstico da infecção pelo HIV vírus da SIDA/AIDS, estes testes até a sua terceira geração só detectavam a presença de anticorpos (IgG e IgM) três ou quatro semanas após o contato, no entanto, os testes de quarta geração já detectam tanto anticorpos como…

1 - Situação de revisão: Situação Data Alteração 0.0 0.0 2 - Objetivo: Estabelecer os procedimentos da coleta de material dos pacientes, da identificação, da separação da amostra, estocagem e rejeição das amostras consideradas inadequadas. 3 - Campo de Aplicação:  1 - Diretoria do Laboratório  2 - Responsável Técnico  3 - Supervisor Técnico  4 - Unidade da Garantia da Qualidade  5 - Chefes de Setores  6 - Coordenadoria da Secretaria  7 -…

1 - Situação de revisão: Situação Data Alteração 0.0 0.0 2 - Objetivo: Estabelecer os procedimentos da coleta de material dos pacientes, da identificação, da separação da amostra, estocagem e rejeição das amostras consideradas inadequadas. 3 - Campo de Aplicação: 1 - Diretoria do Laboratório 2 - Responsável Técnico 3 - Supervisor Técnico 4 - Unidade da Garantia da Qualidade 5 - Chefes de Setores 6 - Coordenadoria da Secretaria 7 - Entidade…

diagnóstico de várias doenças infecciosas uma vez que vários agentes patológicos induzem a produção de anticorpos (imunoglobulinas) por parte dos linfócitos B do sistema imunológico humoral humano. Este é o teste de primeira linha no diagnóstico da infecção pelo HIV vírus da SIDA/AIDS, estes testes até a sua terceira geração só detectavam a presença de anticorpos (IgG e IgM) três ou quatro semanas após o contato, no entanto, os testes de quarta geração já detectam tanto anticorpos como…

gênero, idade, posição, atividade física, jejum, dieta e uso de drogas para fins terapêuticos ou não. Em uma abordagem mais ampla, outras condições devem ser consideradas, como procedimentos terapêuticos ou diagnósticos, cirurgias, transfusões de sangue e infusão de soluções. Controle Das Variáveis Analíticas: Assegurar medidas precisas e exatas por métodos analíticos. Variáveis que Afetam os Métodos Laboratoriais: Qualidade da Água e Pureza dos Reagentes; Manutenção Preventiva…

proteínas apresentadas por dada células) em células diferenciadas e não diferenciadas ou em células normais e cancerígenas, já que cerca de 1000 proteínas podem ser individualizadas simultaneamente. 59 FIGURA 20: IMAGEM DA OBTENÇÃO DE UM GEL APÓS ELETROFORESE BIDIMENSIONAL (EM QUE AS PROTEÍNAS SÃO SEPARADAS POR PESO MOLECULAR E POR PONTO ISOELÉTRICO) 60 FONTE: INFOESCOLA, 2012. O western blotting é uma variação da técnica de eletroforese e se constitui na…