enzima batroxobin

sobrenadante foi aplicado em coluna cromatográfica de exclusão molecular contendo Sephadex G-75 previamente equilibrada, e eluída com tampão bicarbonato de amônio 0,5 M pH 8,0. Frações de 2,5 ml foram coletadas e monitoradas em espectrofotômetro a 280nm. Todas as frações foram submetidas à avaliação de atividade proteolítica para o reconhecimento da atividade de serinoprotease com o substrato BApNA (Nbenzoil- D,L-arginilparanitroanilida). Este substrato sintético que cliva na ligação de arginina liberando o cromóforo p-nitroanilina como produto da reação de hidrólise, a qual produz uma coloração amarela. A fração com atividade de serinoprotease foi purificada em uma coluna analítica de HPLC de fase reversa. As amostras obtidas da etapa de purificação HPLC-F R foram analisadas por eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de SDS-PAGE. RESULTADOS O perfil cromatográfico do veneno de Bothropsbarnettiem Sephadex G-75 mostrou seis frações denominadas Bbt-I, Bbt-Ia, Bbt-II, Bbt-IIaBbt-III, Bbt-IV (Figura 4). As frações foram submetidas a ensaios de atividade proteolítica sobre o BApNA para detecção da fração de interesse com maior atividade enzimática, assim mesmo foram testados ensaios de tempo de coagulação sobre fibrinogênio bovino com o propósito da identificação da serinoprotease. Os resultados mostram que a fração Bbt-Ia apresentou maior atividade enzimática e um tempo de coagulação maior em comparação com as outras frações. A fração Bbt-Ia foi…