Extração E Purificação De Dna

desoxirribonucléico (DNA) livre de contaminação por uma amplificação adequada pode ser uma tarefa difícil quando se utiliza tecidos embebidos em parafina. Objetivo: Padronizar de extração de DNA, reação em cadeia da polimerase (PCR) e seqüenciamento de DNA técnicas paraTP53 análise de mutação. Material e métodos: Trinta e nove casos de carcinoma epidermóide de boca (CEB) foram selecionados a partir da Divisão de Patologia do Instituto Nacional de Câncer (Inca). O método de extração…

PRODUÇÃO Para a produção em escala industrial de uma vacina de DNA para raiva, primeiramente é inserido o gene de interesse, produtor de uma proteína imunogênica em um vetor bacteriano (plasmídeo). Depois vai ser estabelecida a linhagem celular a ser utilizada para a produção e purificação do plasmídeo para a geração de um banco de células referência (BCR) visando estar dentro dos padrões de controle de qualidade para os posteriores testes clínicos. Depois de determinado o…

de isolamento e purificação dos ácidos nucleicos consistem de três etapas: (1) lise das células e solubilização do DNA ou RNA; (2) método enzimático ou químico para remover as proteínas contaminantes e outras macromoléculas; e (3) precipitação alcoólica para isolamento do DNA. Os protocolos básicos geralmente são aplicáveis a um ampla variedade de materiais. O método básico compreende a ruptura do tecido com um homogeneizador, a lise celular com o detergente iônico SDS, extração…

molécula de DNA seja amplificado milhares de vezes em apenas algumas horas. A partir da PCR é possível obter-se cópias de uma parte do material genético em quantidade suficiente que permita detectar e analisar a sequência que é alvo do estudo. A reação explora função natural da enzima chamada de taq-polimerases, extraída da bactéria Thermus aquaticus, ciclos passa por diferentes temperaturas. As etapas do processo consistem em Extração do DNA da amostra que se pretende estudar…

. . . . . . . . . . . . . . . . 67 4.1 Etapas do protocolo de extração do DNA genômico bacteriano . . 74 4.2 Etapas do protocolo de extração do produto de PCR . . . . . . . . 76 4.3 Mapa do vetor de clonagem pGEM-T Easy (PROMEGA) . . . . . . 77 4.4 Mapa do vetor de expressão pET-23a(+)(Novagen) . . . . . . . . . . 79 4.5 Mapa do vetor de expressão pET-28a (Novagen) . . . . . . . . . . . 81 4.6 Etapas do protocolo de extração de DNA plasmidial . . . . . . . . 85 4.7 Esquema geral da…

Nucleotídeos de DNA ou RNA DNA • • • • • Ácido dexorribonucleico Polímero de nucleotídeos Esqueleto hidrofílico Fitas complementares (duas) Guarda as informações para a síntese proteica Proteínas: Expressão Gênica 2 Estrutura química do DNA • Duas fitas de ácidos nucleicos enroladas em hélice unidas por Ligações de Hidrogênio • Pareamento ocorra, ambas as FITAS têm que ser ANTIPARALELAS • O pareamento G-C tem 3 ligações de hidrogênio • O pareamento A-T tem 2 ligações de hidrogênio…

microeucariontes tem tido como base, a extração de DNA, com amostras do meio ambiente. Os métodos para recuperar o DNA do solo podem ser nomeados como extração direta ou indireta. Na pesquisa foi utilizada a extração indireta, pois o método utiliza o Ludox em uma centrifugação, para extrair DNA dos microorganismos. Du. et al (2009) A centrifugação Ludox teve alta eficiência de extração - mais de 97% para ciliados, diatomáceas, nematóides e outros. A extração indireta foi testada…

resultados indicam que a presença de luminol não impediu a detecção de sangue presente nas amostras analisadas através da pesquisa de gamaglobulinas humanas (tabela 1). As quantidades de DNA obtido nas extrações das amostras podem ser observadas na figura 2. Observou-se que não houve interferência na tipagem de DNA pela metodologia de PCR, mesmo em tempos de incubação superiores a 48 horas, prazo em que normalmente os exames periciais relacionados a delitos criminosos são realizados. C1…

interações entre nTPx e as proteínas supracitadas serem estabelecidas através de dissulfetos mistos. Este trabalho teve por objetivo a avaliação de interações previamente descritas na literatura entre nTPx e Mec3, Pcl1 e Dog2 por meio da expressão e purificação destas proteínas e avaliação in vitro de interações como também in vivo através de ensaios de duplo híbrido. Diversos esforços com diferentes abordagens foram efetuados, entretanto não foi possível a superexpressão de Mec3,…

MOLECULAR PARA INICIANTES Seropédica, 2011 LISTA DE ABREVIAÇÕES, SIGLAS E SÍMBOLOS A base púrica Adenina BLASTn do inglês “Basic Local Alignment Search Tool - nucleotides” C base pirimídica Citosina DNA ácido desoxirribonucléico dNTPs trifosfatos desoxirribonucleotídeos dot-ELISA do inglês “dot-Enzyme-Linked Immunosorbent Assay” EDTA ácido etileno diamino tetracético ELISA do inglês “Enzyme-Linked Immunosorbent Assay” EMC…