relatorio

Relatório

Ensaio de Lípidos e Proteínas

O tecido utilizado é cerebelo.
Sonicar as amostras
Adicionar 500µL da amostra em ependorf e centrifugar por 10 minutos (5700rpm e 2700crf).
Será utilizado apenas o sobrenadante.
Acrescentar NMFI(325µL) e Acido Metano sulfônico(75µL), levar ao banho maria a 45°C.

MDA
Água destilada
0
˗
100
20
10
90
40
20
80
50
25
75
100
50
50

BSA(µL)
Água destilada(µL)
0
˗
20
0,25
2,5
17,5
0,5
5
15
1
10
10
1,5
15
5

Ensaio da Curva de Proteínas

Preparar as concentrações dos pontos das curvas, adicionando o BSA e em seguida água destilada.
Transferir as diferentes concentrações de BSA para a placa, será feito a triplicata adicionando 5µL em cada poço da placa.
Adicionar 250µL de corante de Bradfort nos poços contendo os padrões.
Quantificar a absorbância nas amostras e padrões no espectofotômetro em um comprimento de onda igual a 568nm.
Fazer o gráfico no Excel.

Pontos
BSA(µL)
Água destilada(µL)
0
˗
20
0,25
2,5
17,5
0,5
5
15
1
10
10
1,5
15
5

Nível de Nitritos (Reação de Gress)

Fazer NO com Hg1 e Hg4 cérebro total, tecido sem diluição e com diluição 1:2
Pontos da curva: 0, 5, 10, 20 e 40.
Usar 400µL da amostra e centrifugar a 1400rpm por 10 minutos.
Desses 400µL após a centrifugação retirar 100µL e colocar direto no poço da microplaca + 100µL e colocar direto no outro poço + 50µL colocar direto no outro poço e 50µL de água destilada + 50µL de amostra com 50µL de água destilada.

OBS: As proteínas no ensaio de NO deve ser feita do homogeneizado, ou seja, antes da centrifugação porque a rotação de 1400rpm destrói as proteínas.

C1 x V1=C2 x V2
100 x V1 = 40 x 800
V1 = 320µL

NEDA(µL)
Sulfa(µL)
0
50
50
5
50
50
10
50
50
20
50
50
40
50
50

A incubação é realizada na microplaca por 20 minutos.
A leitura é realizada no