Questoes eletroforese

QUESTÕES - ELETROFORESE
1) Explique o princípio da separação eletroforética para proteínas e ácidos nucleicos.
A grande maioria das análises protéicas é realizada através do sistema de eletroforese denominado SDS, na qual se usa o detergente dodecil sulfato de sódio (“sodium dodecyl sulfate”). Basicamente, a proteína é desnaturada por aquecimento na presença de 2-mercaptoetanol, que rompe as ligações dissulfeto, e os polipeptídios adquirem a carga negativa do SDS. A separação no gel dá-se unicamente pela diferença dos pesos moleculares (Alfenas et al., 1999).A eletroforese de proteínas é realizada principalmente para quantificar as proteínas do sangue, baseiando-se na migração das diferentes proteínas do soro frente a uma corrente elétrica, levando-se em consideração a carga elétrica das cadeias laterais dos aminoácidos quem compõem essas proteínas.
Já A partir da ampla variedade de estratégias de separação de proteínas disponível, a eletroforese tornou-se o primeiro princípio explorado para separação de fragmentos de DNA e RNA. A migração eletroforética de ácidos nucléicos é amplamente empregada em técnicas de biologia molecular, para separar, isolar e manipular fragmentos deDNA/RNA. Tais moléculas são relativamente simples quimicamente, de modo que apenas tamanho, conformação e composição de duplex podem ser usados para manejo eletroforético. O sentido da migração dos ácidos nucléicos é sempre em direção ao ânodo ou polo positivo, pois possuem carga total negativa decorrente de seus grupamentos de fosfato. Além disso, em presença de tampões adequados, que permitem a desnaturação das conformações secundárias ou terciárias, fragmentos lineares pequenos, bem como fitas simples, migram mais rapidamente do que os longos e os de fita dupla (Walker & Rapley, 1999).

2) Qual a função do corante e tampão de corrida?
No caso da prática realizada o tampão utilizado foi o TBE ou Tris/Borato/EDTA. As soluções Tris-ácidas são tampões eficientes para condições