Prática de laboratório

Atividade prática - Extração do DNA da cebola (Alliun cepa) OBJETIVOS Conhecer os princípios básicos da extração do material genético da cebola, a partir dos tecidos do bulbo.

PRÉ-REQUISITOS O aluno deve conhecer a composição da célula, com relação à sua estrutura química e aos seus componentes. INTRODUÇÃO Para a análise do DNA de células eucarióticas, a primeira etapa importante é o seu isolamento. O procedimento a seguir é utilizado para extrair grandes quantidades de DNA a partir de cebola. Protocolos similares são usados nas extrações de DNA de outras fontes, como amostras de sangue, tecidos, etc. A extração de DNA de células eucariontes consta fundamentalmente de três etapas: !"ruptura (física e química) das membranas celulares para liberação do material genético; !"desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos: DNA e proteínas; !"separação do DNA dos demais componentes celulares.

MATERIAIS !"Álcool isopropílico (Isopropanol) !"Cebola picada !"Solução de lise (quebra): 4 colheres de sopa de detergente incolor (SDS – Dodecil Sulfato de Sódio), 1 colher de chá de cloreto de sódio, 75 mL de água. !"Papel de filtro !"Gelo !"2 béqueres pequenos de plástico (50 mL) e 1 béquer de 500 ou 1000 mL !"Funil !"Tubos Falcon (tubos cônicos de 50 mL) ou tubos de ensaio com tampa !"Bastão de vidro ou de madeira (para maceração) !"Estilete ou faca de cozinha !"Banho-maria (~60 ºC) !"Palitos de sorvete

Programa de pesquisas aplicadas sobre a melhoria do ensino público no Estado de São Paulo - FAPESP Parceria USP-São Carlos e EESOR

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Atividades de apoio em Biologia Celular e Molecular PROCEDIMENTOS !"Pique a cebola em pedaços pequenos; !"Coloque no béquer pequeno de plástico (50 ml) 4 colheres de chá de pedaços de cebola; !"Adicione 2 colheres de sopa de solução de lise; !"Macere intensamente com o auxílio do bastão de madeira; !"Complete com a solução de lise até 25 mL no béquer, misturando a solução; !"Coe a solução, com o auxílio do funil e do