protocolo de atividade prática enzimas

ATIVIDADE DA UREASE EXTRAÍDA DE SOJA

OBJETIVO: Demonstrar a natureza protéica da enzima Determinar Qualitativamente a atividade enzimática Mostrar a desnaturação protéica Exemplificar inibição enzimática Demonstrar a especificidade da ação enzimática

FUNDAMENTO TEÓRICO:
A urease é uma enzima que catalisa a hidrólise de uréia em dióxido de carbono e amônia, os quais, em meio aquoso, levam à produção de carbonato de amônia.

A atividade da enzima pode ser verificada pela formação de carbonato de amônio, que é um sal de reação básica e cuja presença pode ser revelada por meio de um indicador ácido-básico como o vermelho de fenol, por exemplo. A urease existe em algumas bactérias e plantas e pode ser extraída com facilidade da soja.

TÉCNICA:
a) Reação do biureto.
A reação do biureto, é uma reação para caracterização de proteínas na amostra.
TÉCNICA
TUBO
Águadest
Solução de urease reativo de biureto
Observação
01
2mL
-
2mL

02
2mL
2 gotas
2mL

b) Teste de atividade de enzima
Neste teste utiliza-se o indicador vermelho de fenol, que passa da cor amarela (em meio ácido ou neutro) para a cor vermelho (em meio alcalino)

TÉCNICA
TUBO
H2O dest
Sol. de urease
Sol. tampão com uréia
Sol. tampão sem uréia Verm. de Fenol
Observação
01
2mL
2 gotas
3mL
-
1 gota

02
2mL
2 gotas
-
3mL
1 gota

c) Desnaturação de enzima pelo calor.
TÉCNICA
TUBO
H2O dest
Sol. de urease
Ferver
Sol. tampão com uréia
Verm. de fenol
Observação
01
2mL
2 gotas
Sim
3mL
1 gota

02
2mL
2 gotas
Não
3mL
1 gota

Procedimento: nos dois tubos de ensaio, colocar 2mL de água destilada e 2 gotas da solução de uréase. Ferver apenas o tubo 01 durante 2 minutos após este procedimento, adicionar aos dois tubos a3,0 mL da solução tampão com uréia e o1 gota do vermelho de fenol.

d) Inibição de enzima por sais de mercúrio.