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UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
QBQ0316 N - Bioquímica Experimental
RELATÓRIO 01
Déborah F. Rigo, Nº USP 8021252
Pedro H. S. Medeiros N° USP: 5899281
Tarik K. Andrade N° USP 8072472
Grupo 10
São Paulo, 2013
1.0 Introdução:
As leveduras são fungos unicelulares que têm como principal função para os humanos a fermentação. Mais especificamente a levedura saccharomyces cerevisiae, é usada na fabricação de pães e bebidas alcoólicas, sendo uma das mais antigas aplicações de um microrganismo no cotidiano (1). Seu uso como modelo biotecnológico já é consagrado (2, 5), sendo um organismo robusto para experimentos na área de bioquímica e biologia molecular.

Figura SEQ Figura \* ARABIC 1: estrutura tridimencional da alfa-glucosidase
A enzima alpha glucosidase (figura1) é a enzima responsável por hidrolisar dissacarídeos na porção não redutora com ligação alfa, liberando uma alpha glicose (figura2) (3). Ela está presente em diversos organismos, tendo papel, junto a outras enzimas (4, 5), de degradar açúcares complexos em monossacarídeos que possam ser processados na geração de ATP e formação de produtos metabólicos secundários. Figura SEQ Figura \* ARABIC 2: mecanismo de hidrolise da sacarose
2.0 Objetivos
Prática 1: Romper céluas de Saccharomyces cerevisiae
Prática 2: Dosar colorimetricamente proteínas no lisado de Saccharomyces cerevisiae.
Prática 3: Determinar a atividade da α-glicosidase no lisado de Saccharomyces cerevisiae
Prática 4: Determinar o efeito do pH na atividade catalítica da α-glicosidase.
3.0 Materiais e Métodos
3.1 Prática 1:
Foi ressuspenso 1g de células da levedura Saccharomyces cerevisiaeem 4 ml de tampão de lise, e em seguida foram adicionados 40 μl de solução de PMSF em etanol 100mM, homogeneizando-se a mistura com o auxílio de um agitador. Adicionou-se pérolas de vidro (aprox. 8mL) e agitou-se a mistura por 1 minuto, seguido de 1 minuto de repouso em banho de gelo. Repetiu-se o ciclo por