Gastrulação

PARTE B

Aula 5 – Determinação de eixos corpóreos e gastrulação

Nessa etapa retomamos as figuras de diafanização e determinamos os eixos corpóreos partindo das estruturas esqueléticas que determinam a coluna vertebral. Indicamos a metodologia que vc deverá inserir abaixo das fotografias dos peixes diafanizados. Indicamos sites de filmes para visualização da gastrulação e determinação final de eixos.

1.Insira aqui os sites que indicamos e ainda dois novos sites, ou seja, dois outros sites que vc pesquisou e que tratam de demonstrar como ocorre a gastrulação e determinação de eixos em um vertebrado e em um invertebrado. http://www.dnatube.com/video/1682/Mitotic-divisions-in-Drosophila-mutant-embryo-BNT http://www.dnatube.com/video/6046/Early-mitosis-in-a-Drosophila-embryo http://www.dnatube.com/video/2386/Early-Zebrafish-Development http://lineu.icb.usp.br/~cewinter/Irene_2013/aula_01.pdf http://www.youtube.com/watch?v=7s-J1MG3CNw 2. Relate com detalhes o uso da técnica de diafanização, inserindo informes que demonstrem a sua importância para se compreender melhor a etapa de ossificação endocondral.

Diafanização de tecidos moles e coloração do tecido ósseo pelo Vermelho de Alizarina e Alcian Blue

FIXADOR: Paraformaldeído em tampão fosfato de sódio 0,1M pH7,2 a 10% por 4 horas (o volume deve ser 5 vezes o volume do animal a ser fixado);
TRATAMENTO:
Concentrações crescentes de 2% até Hidróxido de Potássio (KOH). Observar diariamente, trocar de solução a cada 24h por 25 dias;
Glicerina em concentrações crescentes, diluída em tampão fosfato + cristais de timol para finalizar diafanização, trocas a cada 2 dias por 10 dias.
OBS.: 1 - A glicerina é material tóxico. Trabalhar em capela.
COLORAÇÃO: Solução Alcóolica de Alizarina Red S ou Alizarina P.A. por 24 h (Diluir 1g de Alizarina em 90ml de álcool 92%). Adicionar 15 gotas a solução de KOH e aguardar 24 h. Lavar rapidamente em álcool 92% e água destilada. Lavar no ácido acético a 3%. Corar com o 30 gotas